【2017年整理】培养基有效期的验证方案-2.docVIP

培养基有效期的确认 本方案已由下列人员审查并批准文件责任 职位 签字 日期 报告者 审核者 审核者 批准者 .接受标准试验用菌悬液每1ml含菌数小于100cfu.操作程序： 实验仪器：LRH-250A（广东省医疗器械厂， 30-35℃, 23-28℃, 20-25℃）；XG1.DMX-0.36B型脉动真空灭菌器（山东医疗器械股份有限公司 编号10.0311）.2验证培养基：硫乙醇酸盐流体培养基TGB(德国merk)，大豆酪蛋白消化肉汤培养基TSB(德国merk)，营养琼脂培养基NA(德国merk)，萨布罗葡萄糖琼脂培养基硫酸月桂醇肉汤亮绿乳糖肉汤培养基麦康凯琼脂培养基Mac.A假单胞菌分离琼脂培养基绿脓荧光素测定用培养基PAF绿脓菌素测定用培养基PAP 甘露醇胆盐琼脂培养基 (MSA)溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基（CET）沙门氏菌增菌培养基(RVSB)木糖赖氨酸脱氧胆盐琼脂XLD麦康凯肉汤培养基Mac.B曙红亚甲蓝琼脂培养基EMB三糖铁琼脂TSI萨布罗葡萄糖肉汤培养基SDB梭菌增菌培养基RCM哥伦比亚琼脂培养基CA肠肝菌增菌培养基EEB-M紫红胆汁葡萄糖培养基VRBGA试验菌: 金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus [ATCC 6538] 大 肠 埃 希 菌Escherichia coli [ATCC 8739] 沙门氏菌Salmonella typhimurium [ATCC 14028] 铜 绿 假 单 孢 菌Pseudomonas aeruginosa [ATCC 9027] 枯草芽孢杆菌Bacillus subtilisCC6633] 生孢梭菌Clostridium sporogenes [ATCC 19404] 白色念珠菌Candida albicans [ATCC 10231] 黑曲霉Aspergillus niger [ATCC 16404] ） 15.0g 葡萄糖 5.0g L-胱氨酸 0.5g 硫乙醇酸钠 0.5g 或硫乙醇酸 0.3ml 新配制的0.1%刃天青溶液 1.0 ml 酵母浸出粉 5.0g 氯化钠 2.5g 琼脂 0.7g 纯化水 1000ml 用1N 氢氧化钠或1N 盐酸调节pH值，使灭菌后为7.1±0.2，分装成100ml/瓶，按试剂标签说明要求121℃高压灭菌15 分钟，备用。使用前，培养基氧化层的颜色（粉红色）不得超过培养基深度的1/5。否则，须经100°C水浴加热至粉红色消失（不超过20分钟），迅速冷却，只限加热一次，并防止被污染。 3.5.1.2大豆酪蛋白消化肉汤培养基(TSB) 胰酪胨 15.0g 大豆胨 5.0g 氯化钠 5.0g 纯化水 1000ml 用1N 氢氧化钠或1N 盐酸调节pH值，使其灭菌后pH7.3±0.2, 分装成100ml/瓶，按试剂标签说明要求121℃高压灭菌15 分钟，备用。 3.5.1.3营养琼脂培养基 (NA) 胨 .0g 肉浸出粉 3.0g 琼脂 1.0g 纯化水 1000ml 称取干粉适量（按试剂标签说明要求）于纯化水中加热煮沸至完全溶解用1N 氢氧化钠或1N 盐酸调节培养基pH使其灭菌后pH7.0±0.2，置121 ℃高压灭菌分钟备用。萨布罗葡萄糖琼脂培养基： (SDA) 葡萄糖 40.0 g 胨（肉和酪蛋白） 10.0 g 琼脂 15.0 g 纯化水 1000 ml 根据配制总量，称取干粉培养基适量（按试剂标签说明要求）于纯化水中，冷却至室温用1N 氢氧化钠或1N 盐酸调节培养基pH，使灭菌后为5.6±0.2，置121 ℃高压灭菌15分钟。灭菌前加入氯霉素50mg/L。灭菌后于2-25℃贮存。胰酶消化酪蛋白 5.0g 膏