【2017年整理】模拟胃环境从甜椒中分离得到的果胶多糖的化学组分以及抗炎活性.docVIP

模拟胃环境从甜椒中分离得到的果胶多糖的化学组分以及抗炎活性 摘要： 将新鲜甜椒用含盐酸（PH1.5）和胃蛋白酶的盐水在37℃下处理4h，从中提取出一种果胶多糖，命名为capsicuman(CA)。CA含有D-半乳糖醛酸（GalA，74.0%），鼠李糖（Rha，1.6%），阿拉伯糖（Ara，2.6%）和半乳糖（Gal，2.4%）残基。这种多糖可被1.4-2-D半乳糖醛酸酶消化，得到D-GalA，因此证实了capsicuman是一种果胶多糖。CA的部分酸水解揭示了半乳糖醛酸是这个高分子的核心。用二乙基氨基乙基纤维素通过离子交换色谱可得到纯化后的capsicuman（CA-2）。核磁共振色谱表明capsicuman的主要成分是部分被甲基和O-乙酰酯基团取代的1.4-2-D半乳糖醛酸。对小鼠口服投药capsicumanCA，CA-2和CA（CA-H）的半乳糖醛酸片段，发现肿瘤坏死因子TNF-α的释放量降低，并且在脂多糖LPS刺激后的血液中增加了白细胞介素-10（1L-10）的产物含量。这种果胶可提高注射了致死剂量的LPS的小鼠的存活率。 目前研究表明，含有抗炎活性成分的果胶capsicuman（CA），可通过模拟胃环境从新鲜甜椒中萃取得到。 1.介绍 大量研究表明炎症在动脉粥样硬化、糖尿病、高血压和肥胖症中扮演了重要角色。已证明水果和蔬菜可降低炎症的临床反应。起初人们认为水果蔬菜中的膳食纤维有助于抗炎反应，但后续研究表明，相反地，吸收的膳食纤维与引发炎症有关。我们熟知果胶多糖是植物细胞壁的基本结构元件。它们也是膳食纤维的成分之一并且已经证明，可通过口服投药激发其抗炎活性。有趣的是，我们可以通过对水果蔬菜的抗炎能力的鉴定以此来认知水果蔬菜及其纤维物质。 甜椒广泛应用于人体营养同时它含有多种生物活性物质，如抗氧化剂和维他命。绿甜椒中含有26%的食物总纤维。同时证明，绿甜椒中的非淀粉多糖中含有CA，60%的糖醛酸和40%的中性糖，主要有葡萄糖24%，半乳糖（8%），和阿拉伯糖（4%）。甜椒中的果胶含量（1%-4%）是通过对半乳糖醛酸的含量测定来确定的。据报道，Chang，Lai，和Chang用冷水和热水处理新鲜甜椒分离提取到了果胶。在此，我们在37℃下含有胃蛋白酶的酸性环境中从甜椒C.annum中提取得到果胶，省去了通常果胶分离步骤中的第一步制备乙醇不容性固形物。 目前的研究目标是纯化和鉴定通过模拟胃环境从新鲜甜椒中提取得到的果胶的特性，并评估它饲喂小鼠后的抗炎活性。 2.材料和方法 2.1 分离capsicuman 新鲜甜椒，C.annum（1.0Kg），从本地市场内收集并用搅拌机搅匀。将得到的材料用模拟的胃环境处理，即HCl(1.27g/L),NaCl(2.05g/L),KH2PO4(0.60g/L),CaCl2(0.11g/L),KCl(0.37g/L),以及胃蛋白酶（0.5g/L），PH=1.5，在37℃下处理4h。提取物过滤后用低速离心机以10000rpm在4℃时离心1h。收集上清液通入一个膜孔为100KDa-300KDa的超滤膜。过滤后残渣是分子量超过300KDa的物质，100KDa-300KDa的物质通过冷冻脱水得到capsicuman CA（0.28g）和CA-0（0.001g）。 2.2 分离单糖成分 三弗乙酸（TFA）（2M，1ml），含有肌红蛋白-肌醇（0.5mg/ml）作为标准，加到2-3mg的多糖样品中。混合物在100℃下反应5h。 CA + 2M TFA GalA + Rha + Gal + Ara 用乙醇反复蒸发水解产物直到干燥来除去过量的酸。反应后生成的单糖混合物用1M的氨水（1ml）溶解。之后向其中加入5mg的硼氢化钠，将混合物在室温下保存12h。用PH=5的冰醋酸除去多余的硼氢化钠。此法是与甲醇共蒸发直至所有水分都被除去。得到的糖醛混合物在干燥的嘧啶（0.2ml）中溶解，向其中加入醋酸脱水物使混合物在室温下过夜反应。向得到的反应混合物中加入甲苯（0.2ml）并蒸发至干燥以除去多余的嘧啶和醋酸脱水物。得到的糖醛醋酸盐混合物溶解于干燥氯仿中，定量转移至离心试管中。此法用来分析全糖。蒸发至0.1-0.2ml的体积后用汽液色谱法分析（GLC）。 中性单糖的质量和含量（与相应的糖醛醋酸盐一样）通过GLC用惠普科技4890色谱法来测定，包括火焰离子化检测仪，HP3395A积分仪带有RTX-1毛细管圆柱（0.25mmφ×30m；Restek）氦气作为载体气体。以3℃/min的速率从175℃（1min）升到250℃（2min），在此条件下进行糖醛醋酸盐GLC。作为整个预备质量的单糖的百分比是用共效应从检电议反应的峰值处计算得出的。肌红蛋白-肌醇作为内标准。 2.3 常规分析法 用3,5-二甲基苯酚与浓H2