基因表达载体的构建.pptVIP

二、基因表达载体的构建（核心步骤） 三、将目的基因导入受体细胞（转化） 常用的受体细胞： 有大肠杆菌、枯草杆菌、酵母菌和动植物细胞等。 1、受体细胞是植物细胞 农杆菌转化法：主要侵染双子叶植物（伤口分泌酚类化合物吸引农杆菌） 基因枪法 花粉管通道法 1）土壤农杆菌法 2）基因枪法 3）花粉管通道法 2、受体细胞是动物细胞 显微注射法 注入动物受精卵 1982年，世界上第一例体型比普通小鼠大1.8倍的转基因超级小鼠诞生 3、受体细胞是微生物 将目的基因导入原核生物的好处是什么？ 繁殖快、多为单细胞、遗传物质相对较少 要想使重组DNA顺利进入细菌细胞内，最大的难题是什么？ 一般用CaCl2处理，改变细胞膜的通透性，使得重组DNA能够进入细胞。 四、目的基因的检测与鉴定 1、检测目的基因 DNA分子杂交技术 提取转基因生物的DNA 制作分子探针（目的基因的一段单链序列） 进行分子杂交 2、检测mRNA 分子杂交技术 3、检测蛋白质 抗原—抗体杂交 4、检测性状 * * 先用同一种限制酶分别切割目的基因和质粒，再用DNA连接酶将二者连接，形成重组DNA分子。 检测转基因生物的DNA是否插入目的基因 检测目的基因是否转录出了mRNA 检测目的基因是否翻译成蛋白质 检测性状 分子水平 个体水平 *