食品免疫学 免疫检测技术与食品安全检测.docVIP

第八章 免疫学技术 第一节 抗原抗体的制备 一、抗原的制备 制备特异性的抗原是制的合格抗体的前提条件，而作为检测诊断的抗原也必须是纯化的抗原。抗原的物质很多，很少是单一成分，必须从复杂的组分中提取分离。 按抗原的物理状态，可分为天然抗原、人工抗原和合成抗原三类。 1、天然抗原的制备 （1）颗粒性天然抗原 常见的颗粒抗原包括动物、植物、微生物的细胞，和有关的细胞组成结构，如细胞的细胞壁、线粒体，细菌的鞭毛和菌毛等。 一般步骤为：首先收集抗原细胞或（和）扩增培养，然后离心或过滤收集细胞或细胞组成结构物，再进行病原微生物灭活。 （2）可溶性抗原的分离纯化 蛋白质、糖蛋白、脂蛋白、酶、补体、细菌毒素、免疫球蛋白片段、核酸等皆为良好的可溶性抗原，免疫前常需纯化。 细胞破碎方法有：冻融法；超声破碎；高速组织捣碎机法；研磨法；溶菌酶、蜗牛酶、纤维素酶处理 可溶性蛋白抗原的分离方法： 离心分离法：差速离心、密度梯度离心 选择沉淀法：盐析沉淀法；有机溶剂沉淀法，常采用乙醇或丙酮 核酸去除法，DNA酶、RNA酶处理； 水溶性非离子型聚合物沉淀法：常用非离子型聚合物为分子量为2000～6000的聚乙二醇（PEG） 凝胶过滤法 ：又称分子筛层析。通过凝胶分子筛作用，可将大、中、小三类分子分开，选择凝胶柱时应注意选用适于分离范围内的凝胶。 离子交换层析法：离子交换层析是利用一些带电离子基团的