为什么要克隆Rht-B1c基因.ppt

真核生物启动子的多元性 启动子包括 TATA序列(TATA box)：-25 ? -35 TATA box的作用：使转录精确地起始； 增强子及其对转录的影响 ①在转录起始点5’或3’侧均能起作用； ②相对于启动子的任一指向均能起作用； ③发挥作用与受控基因的远近距离相对无关； ④对异源性启动子也能发挥作用； ⑤通常具有一些短的重复顺序。 第三节 核酸合成的抑制剂 第四节 基因工程及分子生物学 技术简介 一、基因工程简介 基因工程的操作技术 大白鼠的生长激素基因插入到一个质粒中去，在金属巯基蛋白启动子旁边，这个启动子被金属镉所活化 PCR技术原理示意图 基因工程的应用和前景 克隆羊多利的诞生 原核生物 E.coli, 已知有三种rRNA: 5S, 16S, 23S, 120 b, 1541 b, 2904 b E.coli 有7个这样的操纵子。 2. rRNA加工 真核生物 真核细胞已知有三种 rRNA: 18S、5.8S、28S及5S rRNA 2. rRNA加工 6. 总 结 10-4-10-5 10-9-10-10 差错率 无 有 校正功能 全酶 9种酶和蛋白因子 酶与蛋白因子 不需要 RNA为引物 引物 DNA区段一条链不对称转录 完整两条链双向复制 模板 NTP dDNA 原料 DNA转录 DNA复制 复制与转录比较 DNA和RNA合成的比较 ? 核苷酸合成抑制剂 氨基酸类似物 叶酸类似物 碱基和核苷酸类似物 嵌合剂 烷化剂 ? 与DNA模板结合的抑制剂 ? 作用于DNA聚合酶或RNA集合酶的抑制剂 抗菌素:如利福平、曲张霉素 有机化合物：如磷羧基乙酸 一、基因工程 二、体细胞克隆技术 三、聚合酶键式反应（polymerase chain reaction, PCR） 基因工程亦称遗传工程，即利用DNA重组技术的方法，把DNA作为组件，在细胞外将一种外源DNA（目的基因）和载体DNA重新组合连接（重组），最后将重组体转入宿主细胞，使外源基因DNA在宿主细胞中，随细胞的繁殖而增殖（cloning，克隆），或最后得到表达，最终获得基因表达产物或改变生物原有的遗传性状。 2. 转录的方式 对于整个DNA双链，每条链上有的区段用作有义链，有的区段用作反义链。所以，具有相对意义。 1.转录的酶 亚基组成：a2bbws = a2bbw + s? 全酶 核心酶?? —— RNA聚合酶? a亚基 —— 解开前方的DNA双螺旋、恢复后面的DNA双螺旋 b亚基 —— 催化磷酸二酯键的形成，与链的合成和延伸有关 b‘亚基 —— 与DNA的模板链结合?,与转录的终止有关 二. 原核生物转录 亚基组成：a2bbws = a2bbw + s? 全酶 核心酶?? 核心酶：解开前方的DNA双螺旋、RNA链的延伸、恢复后面的DNA双螺旋 s亚基：识别DNA上转录的起始部位，从而引导全酶结合上去 此外，每个RNA聚合酶还含有2个Zn离子。 1.转录的酶 DNA上存在着转录的起始信号，它是特殊的核苷酸序列，能被RNA聚合酶识别、结合并确定转录启始位点的特定序列，称为启动子（promoter）。转录是由RNA聚合酶全酶结合于启动子而被启动的。 2.转录过程-转录启动 The nucleotide sequences of representative E. coli promoters 2.转录过程-转录启动 聚合酶全酶上的s因子能识别启动子，并识别有义链，从而使全酶定位到启动子部位。 2.转录过程-转录启动 由全酶在启动子附近将DNA局部解链，约解开17个碱基对。（酶与启动子结合的部位是AT富集区，有利于解链）? 第一个核苷三磷酸(常常是GTP或ATP)结合到全酶上，形成“启动子-全酶-核苷三磷酸”三元起始复合物。 第二个核苷酸参入，连结到第一个核苷酸的3羟基上，形成了第一个磷酸二酯键。 s因子从全酶上掉下，又去结合其它的核心酶。 2.转录过程-转录启动 当s因子从核心酶上脱落后，核心酶与DNA链的结合变得疏松(依靠其蛋白质的碱性与酸性核酸之间的非特异性的静电引力)，可以在模板链上滑动，方向为DNA模板链的 3′→ 5′，同时将核苷酸逐个加到RNA链的3-OH端，使RNA链以 5′→ 3′方向延伸。 2.转录过程-链的延伸 DNA上的解螺旋区：在RNA链延伸的同时，RNA聚合酶继续解开它前方的DNA双螺旋，暴露出新的模板链，而后面被解开的两条DNA单链又重新形成双螺旋，DNA上的解螺旋区保持约17个碱基对的长度。 2.转录过程-链