实验六细胞染色体的制备.pptVIP

2011级生工1班罗甜甜小组 华俊豪小组2011级生工1班 一、目的与要求 1、初步掌握小白鼠染色体标本制作方法，了解其原理 2、了解小白鼠染色体的特点 3、掌握常规压片法制备植物染色体标本。 4、了解染色体的生物学意义。 二、材料、试剂与器材 1、 材料 ：小白鼠18-20克、玉米根尖 2、药品： 0．9％生理盐水; 2%柠檬酸钠溶液；秋水仙素溶液； Giemsa液；磷酸缓冲液（PH6.8);吉姆萨染液或0.1%亚甲基蓝液 固定液（甲醛：冰醋酸 3：1） 0.4%KCl液、Carnoy固定液、苯酚品红染液、10%HCl 45%醋酸等 染色体模式图 三、实验操作 1、小白鼠骨髓细胞染色体的制作与观察 1）、实验原理 凡细胞处于活跃增殖状态，或经过处理后细胞可进入分裂的任何动物组织，均可用于染色体分析。给小白鼠体内注射一定剂量的秋水仙素使分裂中的细胞多滞留于中期阶段，染色体具有典型形态。骨髓中具有高度分裂活性的细胞，经过秋水仙素处理，可使分裂的细胞阻断在有丝分裂中期，再经低渗处理，固定，滴片，染色等步骤，可获的染色体标本。 2、植物细胞染色体标本制备 1）实验原理 染色体是细胞分裂时期遗传物质存在的特定形式，是染色质紧密包装的结果，对染色体的观察在研究生物进化、发育、遗传和异变中有十分重要的作用。 　　植物染色体标本的制备。常规压片法仍是当今观察植物染色体常见的方法，其程序包括取材、预处理、固定、解离、染色和压片等步骤，简单易操作，但是染色体易变形、难分散开。 2）实验步骤 (1) 取材：把玉米种子预先浸泡24h，然后转入垫有湿润纸的培养皿中，置25℃温箱中暗培养发根，或者培养洋葱根，于上午8:30—10:00剪下根尖。 (2) 预处理：将剪下的根尖置于0.1％秋水仙素溶液中，浸泡处理2-4 h。 思考题 1、通过对小白鼠骨髓细胞染色体的观察，它染色体的形态属于哪一类型？为什么 2、如果在实验前不给小白鼠腹腔注入秋水仙素，所制备的染色体制片会出现怎么样的情况？ 3、植物细胞染色体制备除了压片法还有什么方法？ 值 日安 排 * * 实验六细胞染色体制备与观察 3、器材： 显微镜，载玻片，盖玻片，镊子，滴管，擦镜纸，刀片，恒温水浴锅 ，离心机,离心管, 小培养皿4套，剪刀和电脑等 问 题 1、什么叫染色体？ 由脱氧核糖核酸、蛋白质和少量核糖核酸组成的线状或棒状物，是生物主要遗传物质的载体。是细胞中可被碱性染料着色的物质。 2、依据着丝粒在染色体上所处的位置划分哪四类？ 1）中间着丝粒染色体（M） 2）近中间着丝粒染色体（SM） 3）近端着丝粒染色体（ST） 4）端着丝粒染色体（T） 只有一条臂。 中期染色体分类的形态图 2）、实验步骤 （1）、在实验前4-8小时，取20g左右的小白鼠，以4μg/ g体重的剂量从腹腔注射秋水仙素； （2)、 取材： 利用断颈法处死小白鼠，置于解剖盘内，剪开后肢皮肤和肌肉，取出动物后肢的胫骨与股骨,剔除肌肉、肌腱，将其置于小培养皿中，用生理盐水洗净，剪去长骨两端； （3)、取1.5ml 2%柠檬酸钠用注射器注入骨髓腔中将骨髓细胞冲洗出来，然后吹打散。转入10ml离心管中。 （4)、在离心管中加8ml 0.4%KCl液，吹打散.将离心管置于37℃水浴锅内处理20min （5)、离心：1500转/min，离心10min （6)、弃去上清液，沿着管壁缓慢加入固定液5ml。 （7)、用吸管轻轻吹打细胞，静止固定20min，离心，弃去上清液。重复上述再固定1次。 （8)、离心完毕，弃去固定液，依据管中细胞的量加入少量的固定液将细胞块吹打均匀，制备成细胞悬液。 （9)、在干净、湿、冷的载玻片上滴一滴细胞悬液，在酒精灯上文火烘干或晾干。 （10)、染色：在载玻片的细胞悬液上滴一滴 1：10 Giemsa磷酸盐缓冲液，染色5min。 （11)、冲洗与观察 (3) 固定：用水洗净处理过的根尖，经Carnoy固定液中固定2-4h，转入70％乙醇中，4℃保存备用。 (4) 解离：取出根尖，用蒸馏水洗净，放入10% HCl中60℃解离 15min，再用蒸馏水洗净。 (5) 染色：苯酚品红或亚甲基蓝 染色5min。 (6) 压片：把根尖放在载玻片上，加一滴45 %醋酸，盖上盖玻片，垂直轻压，使细胞和染色体分散。 （7）镜检 3、实验报告 要求：1、观察小白鼠骨髓细胞染色体的形态， 并绘制染色体图 2、对小白鼠细胞染色体和洋葱根尖细胞 或玉米根尖细胞染色体计数 *