2.2.1沙堡琼脂培养基.docVIP

苹果霉菌的分离与纯化 摘 要：从发霉的红薯上和酸败腐烂的苹果上挑取霉变物用沙堡琼脂培养基28培养2-3天，分离出几个真菌菌株。将分离株重新进行平板划线分离，挑取单菌落表面的少许孢子用马铃薯葡萄糖琼脂培养基进行载片小培养，经28培养2—3天于低倍镜下观察，通过菌丝和孢子对分离株进行鉴定。观察到簇生在分生孢子梗的顶端的呈帚状分枝的分生孢子和有隔菌丝，可鉴定为青霉类菌；观察到分生孢子梗上呈轮状着生、具有3个分隔、弯曲的孢子，可鉴定为弯孢霉类菌；观察到单细胞的芽殖孢子，并通过进一步的酵母菌生理生化测定，可鉴定为酵母菌。 关键词：真菌；菌落；菌丝；孢子 1 前言 真菌一词来源于拉丁文的“蘑菇”，现在真菌这一名词的概念不仅包括蘑菇，而是代表着一个相当庞大的生物类群。什么是真菌呢？从生物学的观点来看，它们是一大类真核微生物，无根茎叶，不含叶绿素，不能利用无机物来制造食物，靠寄生或腐生生活，仅少数为单细胞，其余为多细胞，大多数真菌有分枝或不分枝的丝状体，能进行有性生殖和无性生殖。从形态上分为酵母菌、霉菌、担子菌。 其实，真菌并不像其看起来的这般抽象，在我们的日常生活中几乎到处都有它们的存在，我们每个人都有过接触和不同程度的感性认识。例如酿酒、制馒头用的酵母；酒曲的曲种（曲霉和根霉）；做豆腐乳的毛霉和红曲霉；发酵饲料的黑曲霉；味美可口的蘑菇、木耳、银耳、猴头；作为中药的神曲、麦角、虫草、茯苓、灵芝；此外还有食品、衣物、用具等因潮湿而发生的霉；引起农作物病害的小麦锈病等等都是真菌。 真菌与细菌的大小、形态、结构及化学组成差异很大，单细胞个体比细菌大几倍至几十倍，具有细胞壁，但不含细菌细胞壁的肽聚糖。有些真菌因环境条件的改变而改变形态，称之为真菌的两相性，如假皮疽组织胞浆菌在动物机体呈酵母菌样。而在人工培养基上呈丝状。 真菌不仅种类多，数量大，而且分布极为广泛，与人类生产与生活有着极密切的利害关系。有些菌丝可引起人与畜禽疾病，有些霉菌还产生毒素，直接或间接的危害人类健康。因此，了解真菌的培养方法，认识其形态十分重要。 近年来在真菌分类方面趋向于采用Anisworth bisby的《真菌学辞典》介绍的分类系统。该系统认为真菌不属于低等植物，而是属于单独成立的真菌界，界以下分为黏菌门和真菌门。真菌门再分为鞭毛菌亚门、接合菌亚门、担子菌亚门和半知菌亚门。本研究从自然界分离到几株真菌，并用真菌分类方法对其进行了鉴定。 2 材料 2.1 病料 发了霉的红薯、酸败腐烂的苹果 2.2 培养基 2.2.1 沙堡琼脂培养基成分：蛋白胨10克、麦芽糖40克、琼脂20克、蒸馏水1000毫升 2.2.2 马铃薯葡萄糖琼脂培养基成分：马铃薯200克、葡萄糖20克、琼脂20克、蒸馏水1000毫升 2.2.3 保存琼脂培养基成分：蛋白胨10克、琼脂20克、蒸馏水1000毫升 2.3 器材无菌室、手提式高压蒸汽灭菌锅、电炉、天平、铁架台、灭菌培养皿、锥形瓶、漏斗、试管、烧杯、胶头滴管、石蕊试纸、接种环、酒精灯、量筒、玻璃棒、纱布、滤纸、试管塞、报纸、扎绳、标签、温箱、冰箱、盖玻片、载玻片、显微镜、杜氏管 3 方法 3.1 真菌的分离培养 3.1.1 实验的准备 沙堡琼脂培养基的制备：用天平称取蛋白胨10克、麦芽糖40克、琼脂20克，用量筒量取蒸馏水1000毫升置烧杯中混匀，在电炉上加热熔化，加热过程中不断用玻璃棒搅拌，调整PH值至5.4，倒入锥形瓶中，115灭菌20分钟，倾注平板，冷却[1]。 无菌室、接种箱的清洁：用酒精棉球将接种箱的内部全部擦洗干净，放入试管架、酒精灯、标签、接种环、笔、火柴等实验用具放入接种箱内，密封接种箱。依次打开接种箱与无菌室的紫外灯，紫外线灭菌20分钟。 3.1.2 划线分离培养在酒精灯火焰下进行以下操作 （1）从发霉的红薯上和酸败腐烂的苹果上挑取霉变物用28培养2-3天，分离出几个真菌菌株。将分离株重新进行平板划线分离，挑取单菌落表面的少许孢子用马铃薯葡萄糖琼脂培养基进行载片小培养，经28培养23天于低倍镜下观察，通过菌丝和孢子对分离株进行鉴定。 （2）左手持皿，用左手的拇指、食指及中指将皿盖揭开20度左右的角度（角度越小越好，以免空气中的细菌进入皿中将培养基污染）。划线前先将接种环稍稍弯曲，这样易和平皿内琼脂面平行，不致划破培养基。 （3）右手持接种环，将上述霉变物分区划线接种于沙堡琼脂培养基平板中，划完前一个区域后将接种环在火焰上灼烧灭菌，冷却后与前一区域的最后一两条折线接触划出第二区域，依次类推，共划三到四个区域。划线中不宜过多的重复旧线，以免形成菌苔。 （4） 接种完毕，在皿底上作好日期，平皿倒扣，置28培养2-3天。 （5） 将分离培