2014级植物生物学实验-显微镜技术.ppt

显微镜技术 目录 相关理论知识 显微镜是由一个透镜或几个透镜的组合构成的一种光学仪器，是人类进入原子时代的标志。主要用于放大微小物体成为人的肉眼所能看到的仪器。 显微镜的历史：最早的显微镜是荷兰的眼镜商詹森（Z.Jansen1588-1628）于1604年制造。半个多世纪后，英国物理学家胡克（R.Hooke1663-1703）制造了第一台具有科学价值的显微镜，他首次观察到木栓的显微图象，发现了细胞。真正观察到活细胞的是荷兰科学家列文虎克（Antonie Van Leeuwenhoek1632-1723），他用自制的显微镜观察到池塘中的原生动物、细菌等。1931年，恩斯特·鲁斯卡通过研制电子显微镜，使生物学发生了一场革命。这使得科学家能观察到像百万分之一毫米那样小的物体。1986年他被授予诺贝尔奖。 一、显微镜的分类 可见光显微镜分类 1 根据显微镜的照明技术分为明视野显微镜、暗视野显微镜和荧光显微镜等 2 根据显微镜的成像技术分为相差显微镜、干涉显微镜、微分干涉反差显微镜和偏光显微镜等 3 根据显微镜的构造可以分为倒置显微镜、实体显微镜和比较显微镜等 4 近年来又制造出激光扫描显微镜等 二、明视野显微镜 显微镜的光学系统 显微镜的光学系统 目镜的放大倍数 马铃薯淀粉颗粒4倍镜下观察图片 马铃薯淀粉颗粒10倍镜下观察图片 马铃薯淀粉颗粒40倍镜下观察图片 （5）滤光器 显微镜的机械装置 显微镜的机械装置 （4）镜筒：金属制的圆筒，附着于镜臂上部，其上端放置目镜，下端连接物镜转换器。在设计上目镜、镜筒和物镜的中心必须必须在同一条直线上。安装目镜的镜筒有单筒和双筒两种，双筒的两者之间距离可以调节，以适应人的眼距。双筒之中有一个目镜镜筒装有屈光度调节器，便于两眼视力不同的观察者。 （5）物镜转换器：固着于镜筒的下端，可自由旋转，更换物镜。当他们转到工作位置时即与光轴合轴。安装物镜时要把镜筒提高，以防止镜头碰到载物台。转换物镜要用手指捏紧转换蝶，而不要推物镜，防止破坏合轴。 显微镜的分辨率 显微技术 生物显微技术是指在显微镜下对生命有机体的微观世界进行定性观察（辨别颜色、形状、质地）、定量描述（测量、计数、绘图）以及细微结构的解剖等技术的总称 目的要求及原理 目的：了解普通光学显微镜的构造与原理，掌握明视野显微镜的使用方法。 原理：以透射光入射，显微镜有两种照明方式：一种是临界照明，灯丝经一个聚光器后，其像呈在标本平面上，因此对标本的照明是不均匀的。另一种照明方式为柯拉（柯勒）照明，照明光路中的光学组件包括光源、集光器、视场光阑、孔径光阑、聚光器和物台。柯拉照明比临界照明优越：其一是照明均匀，其二是通过调节视场光阑的大小和位置可以控制标本平面上照明区的大小和位置。当只需要观察或测量标本的一部分时，可以关小视场光阑，减小照明区域，使标本的其它部分不受热，并减少了杂散光的干扰。 试剂和器材 1、材料：标本装片(草履虫) 2、器材：显微镜 显微镜使用方法和注意事项 1.观察前的准备 (1)显微镜从显微镜柜或镜箱内拿出时，要用右手紧握镜臂，左手托住镜座，平稳地将显微镜搬运到实验桌上 (2)将显微镜放在自己身体的左前方，离桌子边缘约lOcm左右，右侧可放记录本或绘图纸 (3)调节光照。对于不带光源的显微镜，可利用灯光或自然光通过反光镜来调节光照，但不能用直射阳光，直射阳光会影响物像的清晰并刺激眼睛。将10×物镜转入通光孔，将聚光器上的虹彩光圈打开到最大位置，用左眼观察目镜中视野的亮度，转动反光镜使视野的光照达到最明亮最均匀为止。光线较强时，用平面反光镜，光线较弱时，用凹面反光镜。对于自带光源的显微镜，可通过调节电阻旋钮来调节光照强弱 (4)光轴中心调节。显微镜在观察时，其光学系统中的光源、聚光器、物镜和目镜的光轴及光阑的中心必须跟显微镜的光轴同在一直线上。使用带视场光阑的显微镜时，先将光阑缩小，用10×物镜观察，在视场内可见到视场光阑球形多边形的物像。如此像不在视场中央，可利用聚光器外侧的两个调整旋钮将其调到中央，然后缓慢地将视场光阑打开，能看到光束向视场周缘均匀展开直至视场光阑的多边形物像完全与视场边缘内接，说明光线已经合轴。 镜检任何标本都要养成必须先用低倍镜观察的习惯。因为低倍镜视野较大，易于发现目标和确定检查的位置。 将标本片放置在载物台上，用标本夹夹住，移动推动器，使被观察的标本在物镜正下方，转动粗调节旋钮，使物