微生物生长曲线的测定.doc

微生物生長曲線的測定 實驗目的 1.瞭解典型微生物生長曲線的四個時期所代表的意義。 2.學習分光光度計的測定原理和實驗步驟。 3.了解微生物生長情形，生理特性與培養特徵。 器材和儀器 1.錐形瓶 2.量筒 3.玻棒 4.定量玻璃吸管 5.不鏽鋼吸管筒 6.酒精燈 7.取藥杓 8.秤藥紙 9.燒杯 10.電子天瓶 11.分 光光度計 12.恆溫水浴振盪器 13.比色管 14.標籤 15.電子天平 試劑及材料 酒精 2.酵母菌粉 3.葡萄糖粉 微生物之生長曲線 以菌數和時間作圖在批次培養情形下，可以菌數和時間作圖，得生長曲線。 實驗以批次培養方式進行 遲滯期(lag phase): 微生物正適應新環境，吸收養份以合成新細胞，細胞雖變大，但仍未分裂，故細胞數目無明顯增加。 對數期(logarithmic phase): 細胞呈幾何級數增加，菌之生理較一致，為微生物實驗最佳時期。 穩定期(stationary phase): 微生物代謝，消耗養分、同時產生代謝毒物，造成新分裂與死亡之菌數約略相等，因此菌數沒太大改變。 死滅期(death phase): 養分已漸消耗完畢，而代謝毒物累積更多，造成新生菌數遠小於死亡菌數，因此菌數遞減。 步驟 1.先紀錄微生物種類含來源 2.酵母菌液的配置;取0.5g酵母菌粉和1g葡萄糖一起加入50ml 的培養液搖均勻 3.取部份菌液加入比色管(8分滿),用分光光度計測其吸光質,波 長用595nm。→為了要做基準線的校正 4.將菌液瓶放在37°c的培養箱振盪培養,每15分鐘取出瓶子,取 部份菌液重複做5次下列的事情: 加入比色管(8分滿),用分光光度計測其吸光質,波長用 595nm。 (2) 用塗碟法測菌數,要先做10倍稀釋至少4次,最後取0.1ml 的菌液滴在培養基的正中央,用滅菌的三角彎棒均勻塗抹。 注意:菌液要先適當稀釋後才塗碟,事後再推算回去 。 5.把每個培養皿放進振盪器,隔天觀察並計算培養基菌數(個 /ml) 數據有六次。 六:實驗成果: 1. 2. 3. 4. 5. 6. 時間與吸光值紀錄表: 時間(分鐘) 0 15 30 45 60 75 吸光度值 1.725 1.745 1.770 1.730 1.723 1.721 時間和菌落數紀錄表: 時間(分鐘) 0 15 30 45 60 75 菌落數 372 400 ? 450 284 240 七.問題與討論 說明各組實驗結果(包含數據和圖形)之生長曲線進行至哪一期?此圖形有何意 義? (1) 0-15分:遲滯期 15-30分:對數期 30-75分:死滅期 要出現的穩定期沒有出現,可能因為營養物質減少的太快導致,也可能是因為去離子水沒用乾淨導致吸光度快速下降 (2) 生長曲線圖可以了解微生物對某生長環境的生長能力，越適合的環境，微生物的曲線會越陡峭，環境不佳的，曲線會持平會下降。 2.測定微生物的生長曲線在微生物學上有何意義? 假設現在想要知道某種抗生素或其他藥物對某細菌是否有影響 那麼可以製作含有此藥物的 agar 並將此菌種培養在上面然後等 測出他們的生長曲線時 就可以知道他們的生長情況假如發現細菌 長的不好 那麼就表示此藥物或抗生素能夠抑制.對抗此菌 如此可去 發展藥物治療此菌引起的疾病就是根據生長的情況可以知道某環境 因子對微生物的影響。 3.說明分光光度計的測定原理和實驗步驟 (1)原理:根據物質分子或離子團隊紫外線或可見光的特性吸收光譜 (2)實驗步驟:先打開開關,設定波長,熱機至少10分,放蒸餾水作為基線後,就可放入你要測吸光度的菌液了 ◎典型光譜分析儀包含的組件: (1)光源 (2)波長選擇器 (3)透明樣品槽 (4)光電偵測器 (5)記錄器 小組討論: 在這次的實驗是否有些步驟缺少或少做的?? 再均勻塗抹菌液時沒有