第六章微生物生长.ppt

微生物生长：细胞物质有规律、不可逆增加的生物学过程。 培养物：在人为设计的条件下培养、繁殖得到的微生物群体。 纯培养物：只有一种微生物的培养物。 纯培养：在实验室条件下由一个细胞繁殖得到的后代。 第一节 纯培养微生物的生长 一、纯培养微生物的分离方法 纯培养的基本步骤： （1）分离 （2）培养 （一）稀释倒平皿法 基本过程： 稀释平板分离法使用过程中的几个问题： 1) 梯度稀释度的确定： 根据微生物在样品中的数量确定稀释度； 2) 选择菌落接种的依据： a、菌落特征； b、菌体特征； 3) 微生物纯培养的标准： 菌落特征一致性； 4) 操作要点： 无菌操作。 （二）平板划线法 用接种环沾少许分离材料，在培养基表面进行多次平行划线，使微生物细胞分开生长，获得纯培养物。 （三）单细胞（孢子）分离法 用显微镜挑取器对准单个细胞挑取，再接种于培养基上培养。 （四）选择培养基分离法 用选择培养基，进行纯种分离。 二、微生物的培养技术 （一）好氧培养法 1.固体培养法 将菌种接种在固体培养基表面，使之获得充分氧气而生长。 主要用试管斜面、培养皿平板、克氏扁瓶、茄型瓶等培养。 2.液体培养法 将菌种接种在液体培养基中培养。 工业上用发酵罐。 （二）厌氧培养法 实验室用厌氧培养装置。 工业上用液体静置培养法。 三、微生物的个体生长 单细胞微生物个体生长 表现为细胞物质合成、细胞体积增加，到一定阶段分裂成两个细胞。 多细胞微生物个体生长 反映在细胞数目、细胞内物质含量增加。 四、微生物的群体生长规律 （一）单细胞微生物的群体生长 1.群体生长的测定方法 （1）直接计数法（全菌计数法） 待测样品稀释，显微镜下直接计数。 所得结果为死菌和活菌的总数。 （2）平板菌落计数法（活菌计数法） 待测液稀释，在平皿中培养，根据出现菌落数推算出原菌液中所含活菌数。 （3）薄膜过滤计数法 微孔薄膜，过滤空气、水中微生物，将滤膜放在培养基上培养，计菌落数。 （4）比浊法 菌悬液,透光度，比色计，计算。 朗伯—比尔定律: A=Kbc （5）称重法 称样品重量，细菌干重约为湿重的20-25%。 （6）含N量测定法 测定细菌中蛋白质，乘6.25，换算成细胞蛋白质总量。 （7）DNA含量测定法 荧光法测DNA，每个细菌DNA含8.4×10- 5ng。 2.细菌的生长规律（生长曲线） 把少量纯种单细胞微生物接种到恒定容积的液体培养基中后，在适宜条件下恒温培养；间隔一定时间取样，测数； 单细胞微生物生长曲线: 　以细胞数的对数值（log10细胞数）为纵坐标，以时间（Time）为横坐标，作出一条动态变化曲线。 微生物生长曲线 （1）延迟期 接种后的一段时间内，细胞数目不增加，甚至还减少。 原因：调整代谢。 特点： 延迟期长短因下列因素而异， ① 菌种类型； ② 菌龄长短； ③ 接种量大小； ④ 培养条件差异。 （2）对数生长期 细胞以几何级数分裂。 生长快，代时短，对环境变化敏感。 特点： ① 细胞繁殖速度快、数量多； ② 细胞表现出典型特征，（大小、形状、生理特性等）。 ③ 酶系活跃、代谢旺盛、代时稳定。 （3）稳定期（最高生长期） 营养物质消耗殆尽，有害物质积累，培养条件变劣。 特点： 细胞数量动态平衡，生长速率等于零。 菌体产量达到最高。 细胞开始贮藏物质（糖源、异染颗粒、脂肪等）； 开始合成次生代谢产物（抗生素）。 （4）衰亡期 细胞生活力继续衰退， 细菌死亡率增高，活菌数迅速减少。 有一阶段活菌数以几何级数下降，称为对数衰亡期。 特点： ① 生长速率为负值； ② 细胞内颗粒更明显； ③ 细胞出现畸形或多形态； ④ 菌体出现自溶。 1.霉菌菌丝的分枝 霉菌菌丝具有许多分枝，菌丝顶端细胞生长的同时，在亚顶端细胞上开始出现分枝，周而复始，形成霉菌的典型菌落。 2.菌丝生长曲线 霉菌菌丝生长曲线与细菌生长曲线类似。 也分为： 延迟期、对数生长期、稳定期、衰亡期。 第二节 理化因素对微生物生长的影响 （一）基本概念： 1.灭菌：采用强烈理化因素使物体内外部微生物永远丧失生长繁殖能力的措施。 2.消毒：采用某些理化因素，杀死物体表面或内部有害病原菌，对被消毒物体基本无害的措施。 3.防腐：利用各种理化因素抑制腐生微生物生长繁殖，达到防止霉腐的措施。 防腐措施：低温、缺氧、干燥、高渗、高酸度、防腐剂等。 4.无菌：没有活的微生物。 无菌技术（无菌操作）：采取各种方法杜绝微生物的进入。 5.抑菌作用：某些物质或因素阻碍微生物生长与繁殖的作用。 6.杀菌作用：某些物质或因素具有杀灭微生物的作用。