血站核酸检测-平凉中心血站.pptVIP

工作流程 标本采集 标本汇集 核酸提取 核酸扩增 结果确认 关注采集、保存、运输的关键点 留样方式、采血管 采血后什么时间离心 采血后保存温度、时间 离心后保存温度、时间（运输） 检测前的保存温度、时间 长期保存的样本 第一步：标本的采集-采血管 无菌真空采血管 一、血清管 普通血清管 带分离胶的血清管 二、抗凝管 EDTA 2K或3K抗凝管 EDTA 2K抗凝间分离胶（PPT) 枸橼酸钠抗凝管 …… 第一步：标本的采集-留样方式 最佳方式：旁袋 1管 5ml用于核酸检测 2管 5ml用于酶免疫测定等 3管用于长期保存留样 旁路采样 1管 5ml用于核酸检测 2管 5ml用于酶免疫测定等 3管用于长期保存留样 小辫留样(不可取) 1管 5ml用于核酸检测 2管 5ml用于酶免疫测定等 第二步：标本的采集-离心 离心条件 800-1600g 20min 离心时间 4小时以内 以免RNA的降解 第三步：标本的运送 应采用不易破碎的容器装载标本 温度2-8 °C 符合生物安全标准 第四步：标本的接收保存 确认标本数量 运输状态 标本状态：溶血、脂血 保存： 用于检测的样本管：检测前保存 4小时内离心，离心后2天内进行检测的可存放2-8 °C。 用于留样备查的样本：3个月以内存放于-20 °C以下，3个月以上置于-70 °C以下。 样本汇集 在Star上进行准备工作：将采血管开盖后装载到专用32孔样品架上。 采血管上条形码一律面向条码扫描器，以方便扫描条码。 按照要求，将TIP头、PCR板、24深孔板、洗脱管、磁套、废弃管放置于平台相应位置。 样本汇集 样本汇集 样本汇集 核酸提取 同样在Star核酸提取仪上进行，紧跟Pooling之后，利用自动移液配置裂解液、结合液、洗液、洗脱液等，利用磁性分离功能自动完成核酸样本的裂解、提取、纯化、PCR试剂配制、PCR上样等实验操作。 血站核酸检测 甘肃省红十字血液中心 王玮蓉 血站核酸检测的意义 核酸检测（NAT）可以 有效地缩短病毒特异抗原和抗体免疫测定的“窗口期”，从而减少输血风险，提高输血安全。 乙型肝炎病毒（HBV）感染检测中，NAT除可缩短HBV感染检测的窗口期外，还可以减少HBV急性感染恢复期、慢性隐匿性HBV感染以及变异病毒株感染的漏检。 丙型肝炎病毒（HCV）感染检测中，可将HCV感染检测的窗口期缩短，减少免疫静默感染的漏检。 人类免疫缺陷病毒（HIV）感染检测中，可将HIV感染检测的窗口期缩短。 检测窗口期 Window Period 核酸研究的历史 1869 米舍尔（Friedrich Miescher） 从脓球分离出细胞核，不受蛋白酶分解，磷含量高，命名为“核素”(nuclein)。 1944 美国微生物学家埃弗里（O.T. Avery ）等的肺炎球菌转化实验。 1953 沃森和克里克（WATSON，CRICK）-DNA双螺旋 Francis Crick 核酸研究的历史 1960年代中期桑格(Sanger)的DNA测序法 1972 伯格(Paul Berg) –重组DNA技术 引起人肿瘤的猴病毒基因与噬菌体lambda的重组 1973 博耶（Herbert Boyer）和科恩（Stanley Cohen）-使用重组DNA技术首次得到了重组DNA微生物(基因工程技术) 1983 穆利斯（Kary Mullis) –PCR技术 核酸的种类 DEOXYRIBONUCLEICACID（DNA） RIBONUCLEIC ACID（RNA）—— ribosome RNA(rRNA) transfer RNA(tRNA) messenger RNA(mRNA) 核酸的分子组成 ?元素组成 C H O N P （恒定，9~10%） ?基本结构单位——核苷酸 磷酸 核苷（戊糖 、碱基） 核酸的理化性质 核酸分子具有强烈的紫外吸收 DNA变性是双链解离为单链的过程 DNA的增色效应 Tm值 变性的核酸可以复性或形成杂交双链 复性 退火 核酸分子复性和杂交示意图 磁珠提取的原理： 第一步：细胞的裂解：破碎细胞，并向溶液中加入磁珠 第二步：结合核酸：pH较低，在高盐环境下，硅胶磁珠带正电荷，选择性的与 优化试剂中的核酸结合 第三步：洗涤：用洗涤液将非核酸成分冲洗分