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液相色谱基础理论 培训课程大纲 1 液相色谱法发展史与分类 2 色谱方法基本原理 3 流动相及色谱柱的选择 4 样品分析方法开发 1 液相色谱发展历史与分类 1.1 色谱的起源 1.2色谱的发展历程 1.3色谱的定义 1.4 色谱中的分离过程 1.5 色谱的分类 1.6 色谱仪介绍 1.1 色谱的起源 (1903) 1.3 色谱的定义 IUPAC definition of chromatography (1993) : Chromatography is a physical method of separation in which the components to be separated are distributed between two phases, one of which is stationary while the other moves in a definite direction. 固定相（stationary phase）：在色谱分离中固定不动、对样品产生保留的一相。 流动相（mobile phase）：带动样品向前移动的另一相。 色谱法：是一种物理化学分离方法，它利用不同组分与两相（固定相和流动相）之间的作用力（分配、吸附、离子交换等）的差别，样品在两相中做相对移动时，各组分在两相间进行多次平衡，使不同物质达到相互分离。 1.4 色谱中的分离过程 1.4 色谱中的分离过程 1.5 色谱的分类 按流动相的物态分: –气相色谱(Gas Chromatography, GC)： 用气体作为流动相(又叫载气) –液相色谱(Liquid Chromatography, LC)： 用液体作为流动相(又叫洗脱剂)?? 按固定相的形态分: –平面色谱?? 纸色谱?? 薄层色谱 –柱色谱 ??按流动相和固定相的相对极性 –正相色谱(Normal Phase Chromatography) 固定相的极性大于流动相 –反相色谱(Reversed Phase Chromatography) 固定相的极性小于流动相 1.5 色谱的分类 HPLC 与 GC 的应用差异 HPLC 与 GC 的应用差异 吸附法 固定相为固体 硅胶 和 氧化铝 是最常用的固定相 因一连串吸附/脱附步骤形成分离 不同物质与固定相之间的吸附程度不同造成分离 分配法 溶质基于在两相之间的分配系数而分离 保留时间长的物质与固定相亲和力较强 两种基本操作模式 正相：极性固定相、非极性流动相 反相：非极性固定相、极性流动相 分子排阻法 依照分子大小分离 固定相具有不同大小孔径 大分子先流出，因其走的路径较短 应用在判定聚合物、蛋白质分子量及其范围 离子交换法 固定相表面带与分析物相反电荷 一般使用弱离子交换树脂 因电荷相互作用力的强弱产生分离 1.6 色谱仪介绍 ProStar 和 PrepStar产品 HPLC 模块 泵：ProStar 210 单泵，二元高压泵，ProStar 230(三元泵），ProStar 240（四元泵），PrepStar 218，SD-1，SD-2 检测器：ProStar 325 UV/VIS 检测器，ProStar 335 二极管阵列， ProStar 363荧光检测器，ProStar 355 示差检测器， ProStar370 电化学检测器，ELSD，MS，MS/MS 自动进样器：ProStar400，410，420，430 组分收集仪：ProStar 701， 704 柱温箱：ProStar500， Metertherm 循环系统： Prostar530 液相色谱的应用 瓦里安高效液相色谱产品系列 传输泵 2. 色谱方法基本原理 色谱基本理论 色谱的主要理论 热力学理论 以相的平衡观点研究色谱过程 塔板理论为代表 (Martin Synge) 动力学理论 以动力学观点研究各种动力学因素对色谱峰的影响 Van Deemter 方程为代表 分离的原理 样品组分在固定相和流动相之间的分配 流动相带动样品经过色谱柱 不同组分与固定相之间相互作用 的强度不同 不同组分在固定相上移动速度不同， 形成分离 分配系数 KD Xm Xs KD1 = [Xs] /