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非金属化合物及其代谢产物的测定Determination of nonmetal compounds and their metabolites 本章介绍内容 一氧化碳 Carbon monoxide 一、理化特性 一氧化碳（CO）是煤、木材、石油等含碳物质燃烧不完全的产物，为无色、无臭、无刺激性的有毒气体。 在空气中爆炸浓度12%～74%。 水中溶解度很低，易溶于氨水。 空气中较稳定。高温下和硫反应生成羰基硫(COS)，与过渡金属反应生成金属羰基化合物，对银盐、钯盐、钼酸盐、五氧化二碘等显示还原性。 二、代谢和生物监测指标 职业接触 非职业接触： CO含量：火药爆炸后气体：30~60%； 汽车废气：0.6～10％； 香烟烟雾：～4%。 碳氧血红蛋白 CO与血红蛋白的亲和力比O2高250倍，与血红蛋白生成碳氧血红蛋白（carboxyhaemoglobin）。氧合血红蛋白的解离度比碳氧血红蛋大3000倍。 　 正常人体内碳氧血红蛋白浓度大约为0.5％，而吸烟者碳氧血红蛋白最高可达15％～20％。中毒死亡可达90% CO中毒 HbCO含量 中毒症状 评价接触水平时注意吸烟史、用药史、贫血等 CO的体内代谢 吸收后的CO绝大部分以原形由肺部排出，排出速度取决于从血红蛋白释放的快慢、肺通气量、吸入氧气的浓度和HbCO的浓度等。 CO半排出期128～409min，平均约300min。 三、样品采集及保存 呼出气 接触CO后3h临近班末进行，收集终末呼出气。按常规采集，收集在采样管或复合膜采气袋中，密封，带回实验室尽快测定。 血液 HbCO的生物半减期约为5h，应在接触CO3h后的班末或接触最高浓度时采集静脉血或末稍血。血样置于加肝素的密闭容器中，4℃保存可一周。用氟化钠作防腐剂。受检者在采样当天不能吸烟。 一氧化碳的生物监测 呼出气中一氧化碳浓度：采用气相色谱法。但要求衍生，操作复杂。 血液碳氧血红蛋白：采用分光光度法 四、血中碳氧血红蛋白的测定WS/T 42-1996 （一）分光光度法 1. 原理：血液中含还原血红蛋白（Hb），氧合血红蛋白（HbO2），碳氧血红蛋白（HbCO）及微量高铁血红蛋白（MetHb）。用还原剂连二亚硫酸钠将HbO2和HbMet还原为Hb，血样中只有HbCO和Hb。HbCO 和Hb的最大吸收波长分别为420nm和430nm，测定血样在两波长下的A，用公式计算求得HbCO百分浓度 本法最低检测浓度为2%HbCO（0.02吸光度对应浓度，10μl血样），测定范围2%～70％HbCO。 2．样品测定 冷藏血样室温放置，混匀。迅速取10ml，加入内盛15ml Tris溶液的具塞试管中(或直接取血10ml)，加入60mg连二亚硫酸钠，轻轻混匀放置10min，测其在420nm和430nm处的吸光度值。 结果计算 吸光度的加合性原则 A420=K1.CHbCO+K3.CHb A432=K2.CHbCO+K4.CHb K2A420=K1K2CHbCO+K2K3CHb (1) K1A432=K1K2CHbCO+K1K4CHb (2) (1)-(2):K2A420-K1A432=K2K3CHb-K1K4CHb CHb=K2A420-K1A432/K2K3-K1K4 CHbCO=K4A420-K3A432/K1K4-K2K3 CHbCO%=CHbCO/CHbCO+CHb 3.摩尔吸光系数的测定 取不吸烟健康人血液（肝素抗凝），水稀释5倍，取0.3ml用稀释液（Tris）稀释至90ml。 通氧气30min（流速30ml/min）。 从中取4份，每份15ml于试管中；其中2份通氮10min除氧，得HbO2液。另2份通纯CO10min，得HbCO液。立即将HbO2、HbCO制备液分别转入盛Na2S2O4试管中，放10min后测430nm和420nm的吸光度值作为计算用摩尔吸光系数。 Tris缓冲液 Tris即三羟甲基氨基甲烷〔tris (hydroxymethyl) aminomethane〕。分子式： C4H11NO3，分子量： 121.14， 为白色结晶体，溶于甲醇、乙酸等有机溶剂。  Tris-HCl的优点： 对生物化学过程干扰很小，不与钙、镁离子及重金属离子发生沉淀。电泳电流小。 ????? 缺点：①pH值受溶液浓度影响较大，稀释十倍，pH值的化大于0.1；②温度效应大，温度变化对pH值的影响大，即： △pKa／℃＝－0.031 ，4℃时缓冲液的pH＝8.4，则37℃时的p