微生物限度检查方法适用性试验方案材料.doc

微生物限度检查方法适用性试验方案 验证方案组织与实施 检查方法工作由质量管理部门负责组织，质量管理部门有关人员组成验证小组，参与实施。 部门 签 名 日 期 质量管理部 方案审核 部门 签 名 日 期 质量管理部经理 部门 批 准 人 批 准 日 期 质量管理部质量总监 目 录概述 验证目的 验证内容四、 五、再验证周期、参考文献、结果评价及结论 1、概述： 微生物限度检查法系检查非规定灭菌制剂及其原料、辅料受微生物污染程度的方法。检查项目包括需氧菌数、霉菌数和酵母菌数及控制菌检查。当建立产品的微生物限度检查法时，应进行需氧菌、霉菌和酵母菌计数方法的适用性试验和控制菌检查方法的适用性试验，以确认所采用的方法适合于该产品的需氧菌、霉菌和酵母菌数的测定和控制菌检查。 由于依照中国药典2010版的检查方法验证,需氧菌、霉菌和酵母菌、控制菌均采用平皿法。故现升级为中国药典2015版，需氧菌、霉菌和酵母菌及控制菌均采用平皿法进行方法适用性试验。 2、试验目的和风险评估： 验证目的：确认所采用的需氧菌、霉菌和酵母菌计数方法及控制菌检查方法适合我公司所生产产品的微生物限度检查。 风险评估： 项目 潜在失效模式 失效影响 采取措施 未按方案执行 试验部分项目出现偏差和漂移 直接影响试验结果的 正确性 严格执行经批准 的试验方案 试验过程操作不当 未达到试验标准 试验失败 未严格遵循试验方案规定 3、验证内容.1、培养基来源： 品名 批号规格来源 胰酪大豆胨琼脂培养基 微生物限度检查用中检所 沙氏葡萄糖琼脂培养基 微生物限度检查用中检所 胰酪大豆胨液体培养基 无菌检查和微生物限度检查用中检所 沙氏葡萄糖液体培养基 微生物限度检查用中检所 麦康凯琼脂培养基 微生物限度检查用中检所 麦康凯液体培养基 微生物限度检查用 中检所 确认人 确认日期：.2、检查用培养基配制方法： 培养基名称配制方法 取本品g，加水1000ml，加热溶解，分装，121℃，15分钟灭菌，备用。 取本品g，加水1000ml，加热溶解，分装，121℃，15分钟灭菌，备用。 沙氏葡萄糖琼脂培养基 取本品.0g，加水1000ml，加热溶解，分装，121℃，15分钟灭菌，备用。 胰酪大豆胨液体培养基 取本品g，加水1000ml，加热溶解，分装，121℃，15分钟灭菌，备用。 沙氏葡萄糖液体培养基 取本品g，加水1000ml，加热溶解，分装，121℃，15分钟灭菌，备用。 麦康凯琼脂培养基 取本品50.0g，加水1000ml，加热溶解，分装，121℃，15分钟灭菌，备用。 麦康凯液体培养基 取本品，加水1000ml，加热溶解，分装，121℃，15分钟灭菌，备用。 确认人 确认日期使用仪器 生化培养箱 生化培养箱 生化培养箱 确认人 确认日期验证试验用菌种：菌种名称代号传代代数来源 金黄色葡萄球菌 CMCC（B）26003 中检所 大肠埃希菌CMCC（B）44102中检所 铜绿假单胞菌CMCC（B）10104中检所 枯草芽孢杆菌CMCC（B）63501中检所 白色念珠菌CMCC（F）98001 中检所 黑曲霉菌CMCC（F）98003 中检所 确认人 确认日期取金黄色葡萄球菌枯草芽孢杆菌的琼脂斜面培物一铂金饵，加入中置30～ 35℃培养箱中培养18～24h，取金黄色葡萄球菌枯草芽孢杆菌培养物1ml加入9ml0.9％无菌氯化钠溶液中，制成10-1 的菌液，依法10倍稀释至10～7， 分取各菌悬液1ml注入平皿中，立即倾注琼脂ml，各菌悬液平行制备两个平皿，平皿法培养计数，取100CFU/ml和1000CFU/ml的菌液备用。取白色念珠菌的斜面培养物，加入中置2～2℃培养箱中培养24～48h，取白色念珠菌液体培养物1ml加入9ml0.9％无菌氯化钠溶液中，制成10-1 的菌液，依法10倍稀释至10～7，取菌悬液1ml注入平皿中，立即倾注培养基5ml，各菌悬液平行制备两个平皿，平皿法培养计数，取100CFU/ml和1000CFU/ml的菌液备用。取黑曲霉的新鲜培养物接种子斜面上，20-25℃培养5-7天，加入3-5ml含0.05%聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱。取1ml加入含0.05%聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液中，制成10-1 的菌液，依法10