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实验十七 动物球虫病实验室诊断技术 一、实验目的及要求 1.熟悉球虫卵囊的形态特征。 2.掌握分离球虫卵囊的方法。 3.了解常见球虫的种类。 4.熟悉鸡球虫感染后的病变记分和粪便记分方法。 二、实验器材 1.仪器设备。 上海XSP-2C生物显微镜（具备10倍目镜和低倍、高倍物镜及油镜）；目镜测微尺和物镜测微尺；盖玻片、载玻片、牙签、洗瓶、平皿；剪刀及手术刀；离心管；血细胞计数板。 2.实验材料。 感染球虫的患鸡,常见的球虫卵囊,蔗糖、食盐、硫酸镁、铬硫酸、重铬酸钾等。 三、实验方法、步骤和操作要领 （一）球虫的形态观察 随宿主粪便排出的卵囊呈卵圆形、圆形或球形；无色、淡黄色或淡绿色，其形态大小随球虫种类而异。外被有两层囊壁，外壁较厚，轮廓清晰；内壁较薄。内含颗粒状的胞质(即原生质团)。卵囊内具有一至多个孢子囊，每个孢子囊内含有一至多个子孢子，因种类而异。艾美耳属的球虫种类经发育后，原生质团分裂为四个孢子囊，每个孢子囊内含有两个子孢子。有些种类的球虫在卵囊的极端具有明显的卵膜孔，有些球虫的卵囊内膜突出于卵膜孔之外，形成极帽。 畜禽常见球虫的种类： 1．牛球虫。 文献报道的有10种，其中9种为艾美耳属（Eimeria）球虫，另外一种为阿沙卡等孢球虫（Isospora akscaica）。以邱氏艾美耳球虫(E. zurnii)致病力最强，牛艾美耳球虫(E.bovis)致病力较强，它们寄生于牛消化道的上皮细胞。 (1)邱氏艾美耳球虫(E. zurnii)。 卵囊呈亚球形或球形，平均直径为18.6μｍ×14.6μｍ。淡黄色，无卵膜孔，胞质充满整个卵囊，无极体。卵囊孢子化时间为24～72小时。 (2)牛艾美耳球虫(E.bovis)。 卵囊呈卵圆形，褐色，有卵膜孔，平均大小27.7μｍ×20.3μｍ，卵囊孢子化时间为48～72小时。 2. 兔球虫。 种类很多，有16种，属艾美耳属。仅介绍两种如下。 (1)斯氏艾美耳球虫(E.stiedae)。 寄生于肝、胆管上皮细胞内。致病力最强。卵囊甚大，长椭圆形，大小为26～40μｍ×16～25μｍ，略带淡红色，囊壁较厚，具卵膜孔。 (2)穿孔艾美耳球虫(E.perforans)。 寄生于肠上皮细胞内。卵囊甚小，椭圆形，两端较钝，无色，大小为13.3～30.6μｍ×10.6～17.3μｍ，卵膜孔不明显。 3. 鸡球虫。 报道的有9个种，属艾美耳属，世界公认的有7个种。 (1) 柔嫩艾美耳球虫(E.tenella)。 寄生于盲肠，多为宽卵圆形，少数为椭圆形，原生质呈淡褐色，卵囊壁为淡黄绿色（图17-1）。其卵囊平均大小为22μｍ×19μｍ，形状指数为1.16，裂殖体很大，直径可达54μｍ，第一代裂殖体包含的裂殖子可达900个，第二代为350个，最短孢子化时间为18ｈ，最短潜隐期为115ｈ。 (2) 毒害艾美耳球虫（E.necatrix）。 其第一、二代裂殖生殖在鸡小肠，第三代裂殖生殖和配子生殖在盲肠。卵囊呈卵圆形，大小为13.2～22.7μｍ×11.3～18.3μｍ，囊壁无色、光滑。具极粒，孢子囊呈卵圆形，有斯氏体，无残体（见图17-2）。 (3) 堆型艾美耳球虫（E.acervulina）。 寄生于十二指肠。卵囊呈卵圆形，大小为17.7～20.2μｍ×13.7～16.3μｍ。光滑，卵囊壁淡黄绿色。孢子囊呈卵圆形，有斯氏体，具极粒，无残体（图17-3）。 (4) 布氏艾美耳球虫（E.brunetti）。 寄生于小肠后段、直肠和盲肠近端区。卵囊平均大小为18.8μｍ×24.6μｍ，是鸡球虫中仅次于巨型艾美耳球虫的第二大型卵囊。形状指数为1.31。有一极粒，无残体和卵膜孔。裂殖体直径为30μｍ。孢子化时间为18ｈ，潜隐期为120ｈ。 (5) 巨型艾美耳球虫(E.maxima)。 寄生于小肠中段。卵囊很大，是鸡球虫中最大型的卵囊，最大的卵囊达到42.5μｍ～29.8μｍ。卵囊呈卵圆形，一端钝圆，一端较窄，黄褐色，囊壁浅黄色。其形状指数为1.47。最大的裂殖体直径为9.4μｍ。（图17-4）。 (6) 和缓艾美耳球虫(E.mitis)。 寄生于鸡小肠前段。卵囊较小，近球形，卵囊壁为淡黄绿色，有一极粒，无卵膜孔，也无残体。卵囊平均大小为15.6μｍ×14.2μｍ，最短孢子化时间为15h.（图17-5）。 (7) 早熟艾美耳球虫（E.praecox）。 寄生于小肠上段1／3处。卵囊呈卵圆形或椭圆形，平均大小为21.3μｍ×17.1μｍ，形状指数为1.24，囊壁光滑，呈淡黄绿色，原生质无色，无卵膜孔和残体，具极粒。孢子囊