实验二线粒体和细胞核的制备与观察.pptVIP

实验二 线粒体和细胞核的制备与观察 指导教师：唐颖 1.实验目的 掌握用差速离心技术分离制备动物细胞核及线粒体的方法。 掌握细胞核及线粒体的活体鉴定方法。 2.实验原理 1）分级差速离心 在一定的离心场中（选用离心机的一定转速），球心颗粒的沉降速度取决于它的密度、半径和悬浮介质的黏度。在一均匀的悬浮介质中离心一定时间，组织匀浆中的各种细胞器及其它内含物由于沉降速度不同将停留在高低不同的位置。依次增加离心力和离心时间，就能够使这些颗粒按其大小、轻重分批沉降在离心管底部，从而分批收集。 细胞器沉降先后顺序先后是细胞核、线粒体、溶酶体和其他微体、核糖体和大分子。 悬浮介质通常采用缓冲的蔗糖溶液。 2.实验原理 2）染色原理 詹纳斯绿Ｂ可专一性地对对线粒体进行活染,这是由于线粒体内的细胞色素氧化酶系的作用，使染料始终保持氧化状态(即有色状态),呈蓝绿色。 Gimesa是一种复合染料，即为酸性染料与碱性染料的结合物。在水溶液中电离为带正电和负电的染料离子。 3.实验材料、用品 实验材料：鼠肝脏,?猪肝脏 实验用品： 试剂：(1）0.25mol/L蔗糖-0.01mol/L三羟甲基氨基甲烷(Tris)-盐酸缓冲液(pH7.4) (2)?0.34mol/L蔗糖-0.01mol/LTris-盐酸缓冲液（pH7.4）。(3)?1%詹纳斯绿B(Janus green B)染液,称取50