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实验五 细菌的培养与消毒灭菌 基础培养基的制备 液培:0.3-0.5%牛肉浸膏+1%蛋白胨+0.5%Nacl+水 半固体:液培+0.1-0.5%琼脂 斜面 固培:液培+2-3%琼脂 平板 血平板:8-10ml脱脂羊血+100ml普通琼脂培养基(50℃?倾注13-15ml/块平皿) 一、基础培养基的制备(操作)(8人/组) 固体培养基的制备 斜面:13支华氏管(2.5ml/支) 11.4g营养琼脂+300ml水 平板:13块 液体培养基的制备:20ml?13支康氏管(1.5ml/支) 半固体培养基的制备:40ml+0.09g琼脂?26支 康氏管(1.5ml/支) 二、细菌的培养法(操作) 2人/套(斜面、半固体、液培、平板) 菌种:金葡菌、大肠杆菌 8人/块:血平板(脓汁标本) 三、细菌的革兰染色检查法(操作) 染色步骤 初染1分:结晶紫(龙胆紫) 媒染1分:碘液 脱色30秒:95%酒精 复染30秒:稀释复红 结果 革兰阳性菌(G+)紫色,如葡萄球菌 革兰阴性菌(G—)红色,如大肠杆菌 临床意义 鉴别细菌:G+和G—菌两大类, 缩小菌范围 指导临床选药:G+菌首选青霉素 G—菌选氯霉素 与致病性关系:G+菌?外毒素 G—菌?内毒素 四、细菌基本形态观察(示教) 五、细菌特殊结构观察(示教) 六、脓汁标本检测一般程序 ?涂片、染色 脓汁 ? 分离培养 ? 鉴定 ?药敏 葡萄球菌与链球菌鉴别:触酶试验 肺炎球菌与甲链鉴别:胆汁溶菌试验 致病性葡萄球菌的鉴定:血浆凝固酶试验、 甘露醇分解试验 七、实验报告 绘细菌基本形态、特殊结构图 记录细菌的生长现象 * 四、环境中细菌的检查法 空气中细菌的检查法(操作 ,1块/班 ) 水中细菌的检查法( 2块/班操作 ) 五、皮肤消毒前后的检查(操作, 8人/组 ) 六、紫外线杀菌试验(操作 ,2人/组 ) 金黄色葡萄球菌 霍乱弧菌 大肠杆菌 肺炎球菌荚膜 破伤风杆菌芽胞 变形杆菌鞭毛
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