免疫原和抗血清制备.pptVIP

案例一 常州狂犬疫苗造假事件 该公司2008年生产的4个批次人用狂犬疫苗效价低于 国家标准，可能导致疫苗接种后免疫抗体水平低，无法充分 发挥疫苗应有的预防保护作用，属于不合格产品。 A vaccine is a biological preparation that improves immunity to a particular disease. A vaccine typically contains an agent that resembles a disease-causing microorganism and is often made from weakened or killed forms of the microbe, its toxins or one of its surface proteins. The agent stimulates the bodys immune system to recognize the agent as foreign, destroy it, and remember it, so that the immune system can more easily recognize and destroy any of these microorganisms that it later encounters. 疫苗的分类 疫苗大致可以分为六大类： 灭活疫苗，是被彻底杀死的病原，相当于把反动分子枪毙以后曝尸示众，由于是已经死掉的阶级敌人，往往导致革命队伍警惕性不很高，常需要反复刺激； 减毒活疫苗，其实就是可以改造好的黑五类后代，经过教育改造，已经减弱或丧失了危害性，进入人体后现身说法介绍反革命分子的长相，并且可以繁殖供长期围观，效果很好，但也存在突然又反叛的危险，所以在筛选确认时耗费时间极长； 类毒素疫苗，是处理后的细菌外毒素，相当于阶级敌人的便便经过消毒后给革命群众作为识别特征； 亚单位疫苗，是除去其他成分后提取病原体中有效免疫原所得，如多糖类疫苗等，相当于将谋逆贼子砍头后传首九边以供识别； 上述种种，均直接来源于病原，真正像照片的，其实是基因重组疫苗和DNA疫苗，它们都是对病原体照相——找到编码免疫原的基因——这段基因相当于底片，在基因重组疫苗中，该基因被插入表达系统——比如把乙肝的HBS抗原基因植入酵母菌当中，酵母菌就是冲片机，表达出的抗原相当于冲印好的照片，经过纯化制成疫苗； DNA疫苗则是将编码抗原的基因转入真核表达载体后注入人体，它需要人体细胞来利用这段基因自己表达抗原相当于上级只发放底片，得自己冲洗。 疫苗都是免疫原？ 免疫原都是疫苗？ 免疫原都是抗原？ 抗原都是免疫原？ 合格疫苗？ 安全性 有效性 专一性 可获得性 适合大批量生产 易保存 经济 如何制备？ 疫苗的制造过程，大体上可以分成4部分： 1.筛选种毒； 2.扩繁病原； 3.处理纯化； 4.验证批签。 如何制备？ 颗粒性抗原的制备（细胞、细菌、寄生虫等） 灭活疫苗 细胞抗原（绵羊红细胞）经生理盐水等溶液 洗净，配制成一定浓度； 细菌抗原 纯菌增菌后处理 制备菌体(O)抗原置于100℃水浴2-2.5h去除鞭毛(H)抗原； 制备H抗原，菌液用0.3%-0.5%甲醛处理； 制备细菌毒素抗原，杀菌后用0.5%-1%氯化钙处理。 可溶性抗原 亚单位疫苗 包括：蛋白质、核酸、多糖、脂蛋白等 来源：组织和细胞 步骤：提取和纯化 粗提 组织、细胞破碎，取上清 组织匀浆：必须为新鲜或低温保存 高速组织捣碎机法； 研磨法（脑、胰腺） 2.细胞破碎： 冻融法，缓慢融化，适用于细胞 超声破碎法，间歇进行，适用于细胞 酶法，不易破坏内含物成分，适用于微生物 表面活性剂处理法，多用于细菌提取核酸 纯化（以蛋白为例） 超速离心法 差速离心法 分离大小和密度差异较大的颗粒 纯化 密度梯度离心法 将样品放在惰性介质（梯度液）中进行离心沉淀 蔗糖、甘油、氯化铯等 纯化 特点 适用于少数大分子抗原及某些比重较小的抗原 纯化 选择性沉淀法 盐析法 纯度不高，适合初步纯化，常用33%-35%饱和度的硫酸铵 有机溶剂沉淀法 必须在0℃下进行，常用乙醇和丙酮 聚合物沉淀法 PEG，分子量越大，PEG浓度越低 核酸沉淀剂法 硫酸鱼精蛋白、核酸酶等去除核酸 纯化 层析法 1.凝胶层析法 分子量不同 2.离子交换柱层析法 蛋白质的等电点不同 3.亲和层析法 生物分子结合的特异性和可逆性 纯化-凝胶层析法 纯化-凝胶层析法 纯化-离子交换层析 纯化-亲和层析 纯化 电泳法 分子量 电荷数量