原位PCR技术讲义.pptVIP

* * * * * * * * * * 工物61班 周义棋 2016011638 2016.11.21 原位PCR是Hasse等人于1990年建立的技术，就是在组织细胞里进行PCR反应，它结合了具有细胞定位能力的原位杂交和高度特异敏感的PCR技术的优点，是细胞学科研与临床诊断领域里的一项有较大潜力的新技术。原位PCR既能分辨鉴定带有靶序列的细胞，又能标出靶序列在细胞内的位置，于分子和细胞水平上研究疾病的发病机理和临床过程及病理的转归有重大的实用价值。 原位杂交：指将特定标记的已知顺序核酸为探针与细胞或组织切片中核酸进行杂交，从而对特定核酸顺序进行精确定量定位的过程。 PCR技术：是一种用于放大扩增特定的DNA片段的分子生物学技术。 原位PCR=原位+PCR 原位PCR技术的大致过程： 原位PCR的基本方法为多聚甲醛固定组织或细胞，蛋白酶消化处理组织；在组织细胞片上滴加PCR反应液进行扩增，覆盖并加液体石蜡后，在原位PCR仪上进行PCR循环扩增，PCR扩增结束后用标记的探针进行原位杂交，最后显微镜观察结果。 原位PCR： ①直接原位PCR ②间接原位PCR ③原位RT-PCR 直接法：进行原位PCR扩增以前，把同位素或非同位素标记的核苷，标记的底物或引物加入PCR反应液中，随着扩增的进行