188Re放射性锡胶体对恶性腹水模型小鼠的治疗作用.docVIP

188Re放射性锡胶体对恶性腹水模型小鼠的治疗作用 　　【摘要】 目的：探讨和评价188Re（铼）标记的锡胶体对恶性腹水动物模型的治疗效果。方法：制备188Re-锡胶体按试剂盒说明书操作，标记率通过色谱法利用放射性薄层扫描仪检测。在体外培养小鼠肉瘤180细胞5×106/0.3 mL注射到ICR小鼠腹腔内建立恶性腹水动物模型。培养3 d后实验组分3个剂量组，分别为188Re-锡胶体37组、18.5组和9.25 MBq/mL组。对照组为恶性腹水小鼠腹腔内注射生理盐水组、正常ICR小鼠腹腔内注射37 MBq/mL 188Re-锡胶体组和正常ICR小鼠组，每组均12只。注射锡胶体3、24 h和48 h后用γ相机分不同时间采集小鼠腹腔内放射性分布图像，然后收集腹腔积液通过免疫印迹法检测Bax蛋白的表达情况，同时取腹腔主要脏器评价腹腔脏器的组织病理学变化。注射锡胶体后每隔2 d进行体重和生存时间的监测，共观察80 d。统计学处理采用SPSS 10.7版软件进行统计学分析，生存时间分析采用kaplan meir统计学方法，组间比较采用log Rank方法。结果：188Re-锡胶体的标记效率均为99%以上。注射锡胶体3、24 h和48 h后用γ相机采集的小鼠腹腔内放射性分布图像显示，放射性胶体均匀分布在小鼠腹腔内无腹腔外漏出。188Re-锡胶体处理的实验组与生理盐水处理的对照组相比肿瘤细胞Bax蛋白的表达明显增加；腹腔脏器的组织病理学检测结果也显示，188Re-锡胶体处理的小鼠与生理盐水处理的小鼠相比，出现肝细胞变性，脾白髓萎缩，中性粒细胞浸润，肠细胞粘连，胃腺体退化等改变。注射37 MBq/mL 188Re-锡胶体的两组小鼠初期与其他各组相比具有体重下降趋势，但随后8～10 d开始体重逐渐增加，各组间未见明显差异（P0.05）。188Re-锡胶体注射后80 d生存率分析结果显示，37、18.5和9.25 MBq实验组生存时间分别为（59.0±8.5）d、（63.6±7.1）d、（54.8±7.0）d，与生理盐水组（20.0±1.9）d相比，均明显延长（P0.001）。结论：188Re标记的放射性锡胶体不仅物理性能好，而且对恶性腹水疗效佳，副反应小，为临床治疗恶性胸、腹水提供了更多的选择。 　　【关键词】 恶性腹水； 188Re-锡胶体； 动物模型 　　恶性腹水是消化系统肿瘤或卵巢癌等通过血管和淋巴管发生转移、肿瘤组织溃破浆膜层或根治术后也常因癌细胞脱落腹腔发生种植性转移。一般患者出现恶性腹水时多为癌症中晚期、体质较差，外科手术、全身化疗和放疗效果也不理想。放射性核素标记的胶体腹腔内灌注治疗恶性腹水具有疗效好、持续时间长和副作用小等特点，广泛应用于临床[1-4]。常用的放射性胶体是198Au和32P标记的放射性胶体，然而放射性核素198Au和32P的物理特征不适合临床应用。放射性核素188Re半衰期17 h，发射高密度的高能β射线（Emax=2.12 MeV），其组织内平均射程为3.8 mm，而且利用它发射（15%、155 KeV）的γ光子，通过ECT等显像设备获得体内放射性胶体的分布图像。无载体188Re可以从188W/188Re核素发生器获得，更适合临床使用[5-10]。因此，188Re标记的治疗用放射性药物的研究逐渐增加，有些药物已应用于肝癌、关节炎和骨转移癌的治疗[11-15]。188Re标记的腔内治疗用放射性胶体有硫胶体和锡胶体。然而，有研究报道称，188Re标记的硫胶体在使用过程中，注射器或其他管壁残留放射性较高，使得难以预测注射剂量，并导致产生多余的放射性废物[12]。因此，本实验通过建立恶性腹水的动物模型，利用188Re标记的锡胶体评价其恶性腹水的治疗效果。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料 小鼠肉瘤180细胞、188Re-锡胶体试剂盒（韩国首尔大学医科大学附属医院核医学科实验室提供）；ICR小鼠（日本SLC提供）；188W/188Re核素发生器（美国橡树岭国家实验室提供）；放射性薄层扫描仪（美国Imaging Scanner system 2000，BIOSCAN）；Bax抗体（美国Santa Cruz Biotech公司）；γ相机（美国ON 410；Ohio Nuclear）。 　　1.2 方法 　　1.2.1 制备188Re 锡胶体 188Re-锡胶体标记按说明书操作，将从188W/188Re核素发生器淋洗下来的新鲜188Re淋洗液（～1110 MBq）、0.1 mol/L HCl 0.2和0.8 mL的分别加到小瓶中，并沸水孵育2 h，冷却后用0.2 mol/L磷酸钠缓冲液（pH=8）进行中和，离心弃去上清液加生理盐水。标记率通过色谱法（ITLC-SG/生理盐水）利用放射性薄层扫描仪检测。放射