九江市空气微生物的调查要点.docx

九江三中2013年暑期研究性学习结题报告课题名称：九江市空气微生物的调查课题编号： 课题组长：张哲课题成员：吴心妍，梁爽，李尚霖班级：高二7班指导老师：方少俊2013年8月8日课题组活动照片压片盖片观察采样染色摘要空气质量日益引起是人们的关注。本文采用平板沉降法，采集了九江市15个公共场所空气中的微生物，并对培养后的各微生物的菌落种类和数量进行了统计，用显微镜对部分有代表性的微生物形态进行了观察、染色鉴定，结果表明，与2003年相比，九江市空气中的微生物含量增加了6.91%，其中细菌数量最多，其次是霉菌等。其中细菌主要包括杆菌和球菌，有些细菌能够产荚膜；霉菌包括黄曲霉、黑曲霉、青霉和其他未知霉菌。在交通车辆多、绿化程度小和人流量大的地方，微生物数量也越多。这些结果表明，要提高空气质量，需要控制车流量、增加绿化面积，另外，路面多洒水，避免灰尘扬起，也能有效减少空气中的微生物数量。关键词空气微生物；平板沉降法；九江；生活环境前言环境污染日益成为当今社会的突出问题，而空气污染则是环境污染的一个重要方面。随着空气污染程度日益严重，空气质量也引起了人们的广泛关注。空气中的粉尘和液滴由于会吸附有毒物质，会严重危害人类的呼吸系统，导致呼吸系统疾病增加，同时这些粉尘和液滴也是空气中各类微生物栖息的场所，粉尘液滴多微生物也必然会多，因此，空气中的微生物的种类和数量是空气质量的一个重要指标。近些年来，九江市经济有了较大发展，但随着经济的发展，空气污染日趋严重，而关于九江市空气中主要微生物的种类有何变化、它们与空气污染有何关系等研究较少，因此，有必要对九江市空气中的微生物进行全面调查。1材料与方法材料1.1.1 培养基酵母膏4 g，葡萄糖4 g，麦芽膏10 g，复合维生素3.5 mg，微量盐1 mL，定容至1000 mL，pH 7.2。（微量盐组成：FeSO4·7H2O 0.2 g，MnCl2·4H2O 0.1 g，ZnSO4·7H2O 0.1 g，双蒸水100 mL）。1.1.2 仪器设备高压蒸汽灭菌锅、培养皿、电热恒温培养箱、超净工作台、竹签、显微镜、载玻片、盖玻片、电子天平等。1.1.3 其他试剂番红染液、墨汁、无菌水。1.2 方法1.2.1培养基配制、灭菌与平板制备将配制好的培养基装入三角瓶中，在灭菌锅内加入足够水，盖上灭菌锅盖，121℃灭菌30 min，待温度冷却到45℃左右，将培养基倒入无菌干燥培养皿中，待凝固即可用于实验。1.2.2 空气微生物样品采集与培养在采样地点将培养皿盖打开，暴露于空气中15 min，每个采样点6个平板，共采集15个地点。样品采集后置于28℃的培养箱中培养1-3后观察。1.2.3 菌落计数培养结束后根据细菌和霉菌的菌落特征，分别对它们进行计数和统计分析，并根据奥梅梁斯基公式计算空气细菌总数。细菌总数（cfu/m3）= 50 000N/AT，其中，A平板面积（cm2）；T平板暴露时间（min）；N平均菌落数（cfu/平皿）。1.2.4 微生物形态观察[1]霉菌形态观察，用镊子从霉菌菌落边缘夹取用小块带菌丝的培养基，置于干净的载玻片上，盖上干净的盖玻片，并用手指轻压，使菌丝贴于载玻片上，压的时候不能移动盖玻片，以免破坏霉菌的特殊结构，然后置于显微镜下观察，先用低倍镜，再用高倍镜。细菌简单染色观察，取干净的载玻片，滴上一小滴无菌水，用无菌干净的竹签挑取少许待观察的细菌，在载玻片上的无菌水中涂匀，并使之在载玻片上形成一薄层，待自然干燥后在酒精灯火焰上方过2-3次，固定菌体，再滴一滴红色燃料，染色2 min后用细水流由载玻片上端流下，洗去染料，自然干燥后显微镜下观察，先用低倍镜，再用高倍镜，最后用油镜。油镜使用方法如下：在盖玻片中央滴一滴香柏油，再转动转换器，将油镜镜头转换到观察位置，并上旋载物台，使油镜镜头浸于油中，但不要使镜头压破盖玻片，以免损坏镜头，然后利用微调缓慢旋下载物台，当出现待观察细菌时，用微调将图像调至清晰，并前后左右移动载物台，选择适当的视野观察目的细菌并拍照。荚膜染色观察，在干净的载玻片上滴一滴稀释的墨汁，含水量高的菌落中利用竹签挑取菌体，涂于墨汁中，盖上盖玻片并轻压，用吸水纸吸取多于的墨汁，置于显微镜下观察并拍照。2 结果与分析2.1 微生物菌落计数实验结果（表1）表明，空气中的细菌远多于霉菌，但采样地点不同它们的比例也不同，总体上细菌菌落数量约为霉菌菌落数量的30倍；不同采样地点的微生物数量有很大差异，在车辆流通多的地方，如三中、五里大桥、新桥头和长虹大道等车流量多或路面灰尘多的地方，每个平板细菌平均菌落数超过80个以上，这可能是由于这些地方车行驶导致地面灰尘扬起，而空气中的微生物都是附着于液滴和粉尘等介质上的，因此，车辆行驶导致其周围空气中的灰