真核表达载体pIRES2―AcGFP1―Ascl2的构建及表达.docVIP

真核表达载体pIRES2―AcGFP1―Ascl2的构建及表达 　　[摘要] 目的 构建真核表达载体pIRES2-AcGFP1-Ascl2，并在真核细胞HEK293T细胞中表达，为今后研究Ascl2基因在Tfh细胞的相关分子机制奠定实验基础。方法 PCR方法扩增健康人外周血单个核细胞中Ascl2基因，连接至pIRES2-AcGFP1质粒的多克隆位点中，构建pIRES2-AcGFP1-Ascl2重组质粒。通过脂质体转染法对HEK293T细胞进行转染。Realtime-PCR及Westernblot方法分析转染pIRES2-AcGFP1-Ascl2重组质粒的HEK293T细胞中Ascl2表达情况。结果 经Realtime-PCR及Westernblot方法，证实Ascl2基因能够在HEK293T细胞中正确表达。结论 成功建立表达Ascl2基因的pIRES2-AcGFP1-Ascl2重组质粒，并能在HEK293T细胞中表达，为进一步研究Ascl2在自身免疫性疾病中Tfh细胞的相关机制奠定了实验基础。 　　[关键词] Ascl2；HEK293T细胞；Tfh细胞；自身免疫性疾病 　　[中图分类号] R73-3 [文献标识码] A [文章编号] 1673-9701（2014）21-0005-03 　　滤泡辅助性T淋巴细胞（T follicular helper，Tfh）是近年研