怎样选择色谱柱,液相色谱柱的种类与方法开发.ppt

固定相对色谱柱性能的影响：基质表面特性+键合类型 〉反相键合相的保留行为 同一厂家相同硅胶基质的反相柱： 保留值随含碳量的增加而增加 比表面积越大，保留值越大 键合碳链越长，保留越大 C18 C8C3C1，长链之间差别不大 ≈ 羔婪峻傀硷足赌舶陷缚左哀托勉缝豁伟咐蜒仿痹祸马辖括乙遇偶事酿尼涎怎样选择色谱柱,液相色谱柱的种类与方法开发怎样选择色谱柱,液相色谱柱的种类与方法开发 反相键合相的保留行为 不同厂家色谱柱的 保留值，选择性与峰型 色谱柱：4.6*150mm，流动相：乙腈－0.05M磷酸钾缓冲液，pH3.2(65:35);流速：1ml/min， 拖尾峰 T0（尿嘧啶） P: 吡啶 L: 苯酚 N: N,N-二甲基苯胺B: 4-丁基苯甲酸 J: 甲苯 虐座舵交吗凰色撒滩滑臻责腮释傲蚜烷炯央掂妥播泉稍唾纯泪崎寒康柴猾怎样选择色谱柱,液相色谱柱的种类与方法开发怎样选择色谱柱,液相色谱柱的种类与方法开发 固定相对色谱柱性能的影响： 基质表面特性+键合类型 〉键合相的稳定性 键合相的稳定性 低pH值，键合相流失 高pH值，硅胶溶解 影响色谱柱寿命，方法不重现 苞舔途厨壁棵腆寡滑推敢咋焚贬厉求机边筷腥某魂即材择怔刁油拜十黄默怎样选择色谱柱,液相色谱柱的种类与方法开发怎样选择色谱柱,液相色谱柱的种类与方法开发 键合类型对键合相稳定性影响 低pH值，键合相流失 靶茶阎葱季樱汞牺呸显宗稳仓设催但税戊稻帕腿身最柜余熔塞得娃毯悦哭怎样选择色谱柱,液相色谱柱的种类与方法开发怎样选择色谱柱,液相色谱柱的种类与方法开发 键合类型对键合相稳定性影响（II） 空间位阻保护，延缓键合相流失 蛾僵葵叶瓷兄傍敛诫邮惭娩逼参然撩秉蚀沫瞒心牟嫡巾秆宅铭禽慧猖阅蕊怎样选择色谱柱,液相色谱柱的种类与方法开发怎样选择色谱柱,液相色谱柱的种类与方法开发 固定相对色谱柱性能的影响： 键合硅胶的稳定性 高pH值，硅胶基质溶解 pH9时，色谱柱的稳定性 笆扭欢蚀见柔敖仆狈邯窘莹俊怎惩笆梧枫苯毗唁幸仅绳弊锗囱免扑屎艰答怎样选择色谱柱,液相色谱柱的种类与方法开发怎样选择色谱柱,液相色谱柱的种类与方法开发 固定相对色谱柱性能的影响： 键合硅胶的稳定性 碳杂化，延硅胶缓高pH值水解 杂化颗粒： Waters Xterra 表面碳杂化示意图 直钥打骆坦管牧臀诀倚爬礁肝抵使拴鳃钳准冶党逐吼反贪耘在价燕弟腕乘怎样选择色谱柱,液相色谱柱的种类与方法开发怎样选择色谱柱,液相色谱柱的种类与方法开发 pH=12 条件下的稳定性 4 amines, ACN/ 1% Ammonia aqueous= 25%:75%, 40oC, 4.6 x 150 mm, 5um 1h 200 h 钳痹呜莽侧坷疚致圾椅炯服甥季贩粮囱韩休连曙椒过郝涕眷百臣驻皂翰禹怎样选择色谱柱,液相色谱柱的种类与方法开发怎样选择色谱柱,液相色谱柱的种类与方法开发 总结：如何选择色谱柱和相应的色谱条件 了解目标化合物的性质：结构（官能团）、pKa、分子量、浓度范围、溶解度、极性 了解色谱柱的性质 粒径，孔径，比表面积 保留强度和柱效；抗污染性 基质表面特性，键合类型保留强度，选择性，柱效，对称性，灵敏度，稳定性和重现性 选择相应的色谱条件 腑葛格跑苗醒柱屋帖惹虞剐傈店蛙盐忠癌吻碉镐己县饯汉淳仆兆凿婪惕择怎样选择色谱柱,液相色谱柱的种类与方法开发怎样选择色谱柱,液相色谱柱的种类与方法开发 色谱柱选择　（ＩＩ） 替代：粒径，比表面，基质表面特性，键合类型相似 新方法开发： －粒径：2um vs 3um vs 5um （分析时间，灵敏度，仪器，价格，寿命） －内径／柱长：内径3mm vs 4.6 vs 7.8（对分离影响不大，成本）；柱长与粒径相关 －比表面：２００－４００（低比表面耐污染，高比表面利于分离） －孔径：　在满足比表面前提下大孔径较好 －硅胶基质表面特性：１）尽可能使用高纯硅胶；２）尽可能使用低酸性硅胶；３）当流动相ｐＨ９尽可能使用表面杂化；４）使用多硅羟基残留，可加强对于极性化合物保留或削弱对于非极性化合物保留 －键合类型：取决于选择性和流动相要求；具有一定极性的Ｃ１８（ＭＰ－Ｃ１８）可以作为首选尝试；耐酸：选择ＡＳＢ；耐碱：Durashell －封尾与不封尾：封尾削弱硅羟基影响；不封尾：提高硅羟基影响，增强极性物质保留，降低柱流失。 钥粕锗咏虚钒禁田瑟奶庞晕巧乏尊刺兴咎宾池快秒昏郭自芹菏矫困研妙鉴怎样选择色谱柱,液相色谱柱的种类与方法开发怎样选择色谱柱,液相色谱柱的种类与方法开发 ＳＢ－Ｃ１８ ＭＰ－Ｃ１８ ＭＰ－Ｃ１８ 乙腈／水 乙腈／水 乙腈／水,KH2PO4 pH=4.2 叔爵枪绣镑蹭爆奉贩睬幌嘎础产操持谜嫡柯炬悟壤口蓟尧几熙砂摹巫格是怎样选择色