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体外诊断实验三【DOC精选】
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深 圳 大 学 实 验 报 告
课程名称： 体外诊断
实验项目名称： ELISA法检测血清中乙肝表面抗体
学院： 医学院
专业： 医疗器械工程
指导教师： 齐素文
报告人：叶振宏 学号：2012220062班级： 1
实验时间： 2015-6-25
实验报告提交时间： 2015-6-25
教务部制
实验目的与要求：
1. 简单描述ELISA检测乙肝表面抗体的原理-抗原抗体间接反应法 2.详细描述乙肝表面抗体的检测步骤以及结果。 3.对实验进行总结和分析。 实验过程及内容：
1. 简单描述ELISA检测乙肝表面抗体的原理-抗原抗体间接反应法
检验原理：
两步双抗体夹抗原ELISA试验 用于检测HBsAg的酶免疫检测法，是在1971年，首先由Engvall，Perimann1，VanWeemen以及Schuurs进行描述的。在1976和1977年，建立了固相“夹心”酶免疫检测法。HBsAg在包被有多克隆抗体（Anti-HBsAg）的固相上被捕获，随后由酶标Anti-HBs进行检测显示。在二十世纪80年代早期，开发了基于单克隆Anti-HBs的HBsAg检测法。
本实验采用单克隆Anti-HBs的两步夹心ELISA试验，微孔板上所包被及酶结合物所用分别为针对表面抗原不同位点的抗体。如果被检测血清中存在表面抗原，则可通过双抗体夹心的桥联将辣根过氧化物酶（HRP）连接到微孔板上，使TMB呈色。
2.详细描述乙肝表面抗体的检测步骤以及结果
主要步骤：
操作步骤
6.1.1、平衡：将试剂盒各组分从盒中取出，平衡至室温（18～25℃），微孔板开封后，余者及时以自封袋封存。
6.1.2、编号：取所需要数量微孔固定于支架，按序编号。
6.1.3、稀释：每孔加入20 ul样品稀释液。
6.1.4、加样：分别在相应孔中加入100 ul待测样本血清、阴阳性对照血清（两组分别加入阳性或阴性对照液）或质控血清。
6.1.5、温育：置37℃温育60分钟。
6.1.6、洗涤：用PBS-T缓冲液充分洗涤5次，洗涤后扣干，每次应保持30～60秒的浸泡时间。
6.1.7、加酶：在每一微孔中加入酶标记抗体50 ul。
6.1.8、温育：置37℃温育30分钟。
6.1.9、洗涤：用PBS-T缓冲液充分洗涤5次，洗涤后扣干，每次应保持30～60秒的浸泡时间。
6.1.10、显色：每孔加底物A、底物B各50 ul，轻轻振荡混匀，37℃暗置30分钟。
所用试剂：
未显色前的照片：
显色后的照片:
结果显示该样本的血清存在乙肝表面抗体
深圳大学学生实验报告用纸
实验结论：
通过这次实验，我了解了ELISA检测乙肝表面抗体的原理，以及其基本的实验步骤。实验中可能出现最终结果显色不明显，这可能由于在洗涤步骤中操作不当，没有洗涤干净。
分析：通过对照组显示的颜色可得，该样本血清有乙肝表面抗体。
指导教师批阅意见：
成绩评定：
指导教师签字：
年 月 日 备注：
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