化妆品中灰黄霉素等9种抗真菌类禁用物质的检测方法.docVIP

附件6 化妆品中灰黄霉素等9种抗真菌类 禁用物质的检测方法 1 适用范围 本方法规定了采用液相色谱-串联质谱法测定化妆品中9种禁用物质：灰黄霉素（CAS号：126-07-8）、酮康唑（CAS号：65277-42-1）、克霉唑（CAS号：23593-75-1）、益康唑（CAS号：27220-47-9）、咪康唑（CAS号：22916-47-8）、氟康唑（CAS号：86386-73-4）、联苯苄唑（CAS号：60628-96-8）、环吡酮胺（CAS号：41621-49-2）、萘替芬（CAS号：65472-88-0）的检测方法。 本方法适用于化妆品中禁用物质：灰黄霉素、酮康唑、克霉唑、益康唑、咪康唑、氟康唑、联苯苄唑、环吡酮胺、萘替芬含量的测定。 2 方法提要 样品经过提取后（其中环吡酮胺的测定需要进行硫酸二甲酯衍生化处理），用液相色谱-串联质谱法测定，以多反应离子监测模式进行监测，采用特征离子丰度比进行定性，待测化合物峰面积定量，以标准曲线法计算含量。本方法的检出限、定量限和取样品0.5 g时的检出浓度、定量浓度见表1. 表19种违禁成分的检出限和检出浓度 化合物 检出限（ng/mL） 定量限（ng/mL） 检出浓度(μg/g) 定量浓度(μg/g) 氟康唑 2.0 20 0.25 1.0 酮康唑 10 50 0.50 2.5 萘替芬 0.40 2.0 0.02 0.10 联苯苄唑 0.40 2.0 0.02 0.10 克霉唑 2.0 4.0 0.15 0.25 益康唑 2.0 20 0.15 1.0 咪康唑 2.0 4.0 0.15 0.25 灰黄霉素 4.0 10 0.25 0.50 环吡酮胺 2.0 10 0.15 0.50 3 试剂和材料 除另有规定外，所用试剂均为分析纯，水为去离子水。 3.1 乙腈，色谱纯。 3.2 硫酸二甲酯，分析纯。 3.3 三乙胺，分析纯。 3.4 乙酸，色谱纯。 3.5 氯化钠，分析纯。 3.6 氢氧化钠，分析纯。 3.7 灰黄霉素、酮康唑、克霉唑、益康唑、咪康唑、氟康唑、联苯苄唑、环吡酮胺、萘替芬对照品（纯度大于97 %）。 3.8 饱和氯化钠溶液，称取40 g 氯化钠，置于250 mL磨口锥形瓶中，加入100mL水，超声15分钟，即得。 3.9 0.3 mmol/L 氢氧化钠溶液，称取 1.2 g 氢氧化钠，置于250 mL烧杯中，加入100 mL水，用玻璃棒搅拌至溶解，即得。 3.10 混合标准储备溶液[(（待测成分）= 1 mg/mL]：精密称取灰黄霉素、酮康唑、克霉唑、益康唑、咪康唑、氟康唑、联苯苄唑、环吡酮胺、萘替芬对照品（3.7）10 mg（精确至0. 1 mg）置于同一10 mL量瓶中，加乙腈（3.1）使溶解并定容至刻度，摇匀，即得质量浓度为1 mg/mL的混合标准储备溶液。 3.11 系列浓度标准工作溶液：用乙腈（3.1）稀释混合标准储备溶液，精密配制得质量浓度为1025、50、100、300、500 μg /mL的系列浓度标准溶液。 4 仪器 4.1 液相色谱-三重四极杆质谱联用仪。 4.2 分析天平：感量0.0001 g。 4.3 分析天平：感量0.00001 g。 4.4 超声波清洗仪。 4.5 离心机。 4.6 涡旋混合仪。 5 测定步骤 5.1未衍生化样品处理（用于测定除环吡酮胺外的8种禁用物质） 准确称取样品约0.5 g（精确至1 mg），置于25 mL比色管中，加入饱和氯化钠溶液（3.8）1mL，涡旋30s，加入乙腈（3.1）1mL，涡旋30s，加入乙腈（3.1）20 mL，涡旋30 s，超声提取30 min，涡旋30 s，加入乙腈（3.1）定容至刻度，4500 rpm离心5 min，取上清液经0.45 μm微孔滤膜过滤后，滤液作为未衍生化待测备用溶液，用于测定除环吡酮胺外的8种禁用物质。 5.2 衍生化样品处理（仅用于测定环吡酮胺） 精密吸取上述未衍生化待测备用溶液1 mL于玻璃试管中，加入0.3 mmol/L 氢氧化钠溶液（3.9）0.5 mL，而后加入50 μL 硫酸二甲酯（3.2），涡旋30 s，置于37 ℃水浴 15 min，最后加入50 μL三乙胺（3.3），涡旋30 s后，经0.45 μm微孔滤膜过滤，滤液作为衍生化待测备用溶液，仅用于测定环吡酮胺。 5.3 未衍生化系列浓度基质标准工作溶液制备 准确称取空白样品约0.5 g（精确至1 mg），置于25 mL比色管中，分别加入系列浓度标准工作溶液（3.11）50 μL，按照“5.1 样品处理”步骤进行前处理，即得质量浓度为12.5、5、10、30、50 μg /g的系列浓度基质标准曲线工作溶液，用于测定除环吡酮胺外的8种禁用物质（基质标准曲线采用的空白样品的性状应与待测化妆品