细胞培养II室生物安全标准操作规程.doc

细胞培养II室生物安全标准操作规程 第一部分 II室生物安全总体要求 目的 为规范细胞培养II室微生物安全操作，保障实验室生物安全，以保证实验室人员的安全及实验室环境不被污染。 2. 适用范围 适用于中心细胞培养II室安全操作过程。 3. 要求 3.1 实验人员进入实验室开展的实验项目应先填写《二院临床研究中心细胞培养II室申请表》。经导师以及中心批准后进行相关培训，培训合格后方可进入实验室开展工作。 每次进行实验前均需提前预订。 实验室内禁止从事与实验无关的活动，实验室的门应始终处于闭合状态。 工作人员不得留长指甲，不得戴戒指、手镯或其它易降低防护用品防护效果的饰物。 实验室内禁止存放非实验物品或长期不使用的储备实验物品。 本实验室可操作病毒类型为载体类病毒（符合BSL-2标准），所有致病性病原微生物操作均不能在本实验室进行。 3.7个人防护 在实验室工作时必须使用个体防护装备。 个人衣服和普通实验服不能穿入细胞培养II室工作区域。 实验室内不得穿长摆裙，短裙及短裤；不得在实验室内穿露脚趾的鞋子。 实验室内严禁处理和配戴眼镜。 严禁穿着细胞培养II室专用防护服离开实验室。 发生手套破损应立即更换。 3.8 操作规范 细胞培养II室包括缓冲区和核心操作区。只有密封在已消毒过的容器中的污染材料才可拿到缓冲区；核心操作区中方可操作病毒。 任何有活性的病毒的操作都应在Ⅱ级生物安全柜中进行。开放式的实验台不允许操作此类病毒。 实验室应保持整洁干净。只有当前正在使用的仪器和物品才可放在实验台上。耗材应贮存在指定的箱子里，随用随取。 注射器和针头只有在绝对需要时才可使用。用过的针头必须放到专用的利器盒中。 应使用塑料器材，玻璃制品只有实验步骤中需要才可使用（比如使用显微或苯酚玻片）。 必须使用带滤芯的吸头和吸管。 所有的管子、瓶子和培养板等必须要标记清楚，而且只能放到细胞培养II室中的培养箱、冰箱或冰柜中。 有活性的病毒除非经实验室负责人许可（如：为了运输标本的需要），否则不许拿出细胞培养II室。 任何情况下书籍和实验记录本都不允许带入细胞实验室II。 第二部分 细胞培养II室人员进出准则 目的 制定细胞培养II室人员进出的标准操作程序，保障实验室生物安全。 适用范围 适用于细胞培养II室人员进出程序。 规程要求 3.1 进入程序 穿上鞋套后方可进入缓冲间，随后戴帽子、戴口罩、戴手套（工作服袖口应扎在手套内）； 进入工作间进行操作，必须穿上防护服才能进行操作。可再戴上一层手套（防护服袖口也应扎在手套内）。 3.2 退出程序 退出工作间时，摘掉最外层手套，将里面朝外，放入高压灭菌袋中；脱掉防护服，悬挂在指定位置，每周消毒一次；如有病毒液污染防护服，立即更换新的防护服，并将污染位置用10%消毒液进行擦拭，随后置入高压灭菌袋中；摘下帽子和口罩，放入高压灭菌袋中。 退出缓冲间时，摘掉鞋套和内层手套，放入指定垃圾袋中；将细胞培养II室入口门关好。 第三部分 细胞培养II室使用标准规程 1. 目的 确保细胞培养II室环境的无菌状态，特制定本规程。 2. 适用范围 适用于无菌间空气微生物监测。 3. 过程要求 开始工作前，工作间和生物安全柜的紫外照射30分钟，然后生物安全柜至少先运转15分钟。 先用70%酒精擦拭生物安全柜的四壁以及台面，然后再把实验用品放到柜里。 生物安全柜中只摆放本次实验必需的材料及用品。为避免交叉污染，实验室用品拿入生物安全柜以前要用70%酒精进行表面消毒。 在实验结束时，包括仪器设备、样本和试剂在内的生物安全柜里的所有物品都应清除表面污染，随后将物品移出安全柜。 工作结束后要用70%酒精擦拭生物安全柜的四壁及台面。紫外线照射消毒1小时（1小时后自动切断）以强化消毒效果。同时工作间紫外照射消毒1小时。 每月应对无菌间进行一次无菌检查记录。 第四部分 细胞培养II室消毒标准操作规范 1. 目的保护细胞培养II室的生物安全。 2. 适用范围 实验室日常清洁，实验过程中产生的污染废弃物、使用过的防护装备及设施设备等的消毒。 3. 过程要求 实验室工作人员做好个人防护。穿好工作服、戴好手套、口罩和帽子等。 预防性消毒：用70%酒精擦拭待消毒对象，作用15 分钟以上。 溢出污染：用吸水纸巾覆盖并吸收溢出物，向纸巾上倾倒适当的10%消毒液（有效氯浓度为5000mg/L），使其覆盖周围区域。使用消毒剂时，应从溢出区域的外围开始，向中心进行处理。作用时间30 分钟以上。 操作过程中，凡是接触过病