仪器分析实验指导书.doc

实验一 高效液相色谱法测定蛇床子提取物中蛇床子素的含量 一、目的要求 1 ．理解反相色谱的原理和应用。 2 ．掌握外标定量方法。 二、基本原理 三、仪器与试剂 仪器:高效液相色谱仪　LC20A;PDA检测器;自动进样器 。 样品:蛇床子根茎、根及叶。蛇床子素标准品。 试剂:甲醇(AR) ,重蒸馏水。 四、实验内容与步骤 1.色谱条件: 色谱柱Agilent XDB-C18 色谱柱(4.6mm ×250 mm ,5 μm) ;流动相甲醇:水 = 75∶25 ; 柱温为30℃;流速1 mL/min ;检测波长322 nm ;进样量10μL。 2.标准液制备及标准曲线制备: 准确称取制备好的蛇床子素标准样品10mg，加蒸馏水溶解后移人10mL的容量瓶中，用甲醇稀释至刻度，摇晃使其浓度均匀，制得1mg/ml蛇床子素标准液，分别取该标溶液2μL, 4μL, 8μL, 16μL进样,分别测出峰面积, 不强制过原点，以浓度对峰面积进行回归, 得标准曲线和回归方程。数据处理机给出峰面积值,以标准品进样量(μg) 为纵坐标( Y) ,峰面积为横坐标( X) ,得标准曲线。 3.样品液制备:精取蛇床子根、根茎、叶粉末(过20目筛) 0.5 g ,置于微波萃取仪中以甲醇提取30min ,定容至25.0ml,即为供试液。 五、实验数据及处理 （1）、以色谱峰面积为纵坐标。蛇床子素标准系列溶液的浓度为横坐标，绘制标准曲线。 （2）、根据试样溶液色谱图中蛇床子素峰面积，查出试样溶液中蛇床子素的含量（g/100Ml）。 六、问题与讨论 （1）、外标法是否要求严格准确进样？操作条件的变化对定量结果有无明显影响？为什么？ （2）、在那些情况下，采用外标法定量较为适宜？ 实验二 气相色谱法测定酒中甲醇含量 实验目的： 1、掌握外标定量法。 2、熟练掌握微量注射器进样技术。 3、掌握色谱工作站的应用。 实验原理： 外标法是在一定的操作条件下，用纯组分或已知浓度的标准溶液配制一系列不同含量的标准样品，定量地准确进样，用所得色谱图相应组分峰面积（或峰高）对组分含量作标准曲线。分析样品时，由准确定量进样所得峰面积（或峰高），从标准曲线上查出其含量。 酒中甲醇含量的测定，以氢火焰离子化检测器利用醇类物质在氢火焰中的化学电离进行检测，根据甲醇的色谱峰高与标准曲线比较进行定量。 实验内容： 1、仪器与试剂 （1）、仪器 带程序升温的气相色谱仪，配置氢焰检测器，化学工作站， 色谱柱RXT--wax 30m X 0 . 25 mm X 0 . 25 mm 或其他中强极性毛细管柱； 自动进样器 （2）、试剂 甲醇（色谱纯） 60%乙醇水溶液（不含甲醇） 2、实验步骤 （1）、色谱操作条件 检测器：氢火焰离子检测器 汽化室、检测器温度：2500C 柱温：起始温度 35 ℃ ，保持 3 min ；然后以 5 ℃/min升温至 75 ℃ ，保持 3 min，再以20℃/min升温至 180℃ ，保持 1.5 min 。 氢气流速：30mL/mim 空气流速：300 mL/mim 氮气（N2）流速：1.5mL/min，恒流；分流比 20 。 （2）、甲醇标准系列溶液的配制 以60%乙醇水溶液为溶剂，配制浓度分别为0.5%、1.0%、1.5%、2.0%的甲醇标准系列溶液。 （3）、色谱测定 用微量注射器分别吸取1.0uL各甲醇标准系列溶液及试样溶液注入色谱仪，取得色谱图，以保留时间对照定性，确定甲醇色谱峰。 （4）、实验记录 浓度 甲醇标准系列溶液 试样溶液 0.5% 1.0% 1.5% 2.0% C2 色谱峰高 3、实验数据及处理 （1）、以色谱峰高为纵坐标。甲醇标准系列溶液的浓度为横坐标，绘制标准曲线。 （2）、根据试样溶液色谱图中甲醇峰峰高，查出试样溶液中甲醇的含量（g/100Ml）。 4、问题与讨论 （1）、外标法是否要求严格准确进样？操作条件的变化对定量结果有无明显影响？为什么？ （2）、在那些情况下，采用外标法定量较为适宜？ 实脸三 原子吸收光谱分析法自来水中钙、镁---标准曲线法 一、目的要求 1 ．学习原子吸收光谱分析法的基本原理。 2 ．了解原子吸收光谱分析仪的基本结构及使用方法。 3 ．掌握以标准曲线法测定自来水中钙、镁含量的方法。 二、基本原理 标准曲线法是原子吸收光谱分哲中最常用的方法之一该法是配制已知浓度的标准溶液系列，在一定的仪器条件下，依次测出它们的吸光度，以标准溶液的浓度为横坐标，相应的吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。样品经适当处理后，在测量标准曲线吸光度相同的实验条件下测量其吸光度，根据样品溶液的吸光度，在标准曲线上即可查出样品溶液中被测元素的含量，再换算成原始样品