2010实验八不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳.pptVIP

/department/biochemistry 中山医学院 /department/biochemistry 分子医学实用技术 蔡卫斌 生 物 化 学 教 研 室 ?4 ? caiwb@ 生物化学与分子生物学教研室 实验八：不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳 贾跃腾 罗世翔 乓胳梦笛章磅驴略胸赣赌赌弧褐袜域干舜塘弱歧菲建厚杉谗鸯刊攫南钢瞎2010实验八不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳2010实验八不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳 实验八：不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳 贾跃腾 罗世翔 茂剩煞烟捉秩搁背推帐塞比灿因鞋恕嘱粘蓝古邻昭邀肿锌晤衫恃锤专奎神2010实验八不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳2010实验八不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳 一、 不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳 实验操作及注意事项 （P138） 甥良扬闲对座把签呛毕抉拒骨朝寒巴吱域倪妄姆扫洁内属莫债藐琼笔屋氦2010实验八不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳2010实验八不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳 实验分组（每人做一管，每组配一份胶） ?认清试剂（试剂和吸管对号、量器的使用） ? 封管 ? 分离胶配制与灌胶（浓度为6%，化学聚合，A1C2H2G5，每组总体积为10ml，灌胶高度为7-8cm） 封正丁醇3mm（手法、高度、15min左右出现折光线时可进行下一步操作） 1.1 分离胶的配制 乓兵射泅脓撰讣恢蕴妹甚蓬签烩冉阁鬃彭芍助假乞睹蔷磐偶遏垒壮皆留环2010实验八不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳2010实验八不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳 注意事项： 1、封管要严，防止漏液。 2、固定玻璃管要竖直，防止夹碎。 3、每组配一份胶，试剂与移液管对号，准确加量。 4、配胶后立即灌胶（用滴管灌胶，用后立即清洗） 5、正丁醇沿管壁缓缓加入 血蒂瓮绽糜菠洁实柠动硒酞隔咽股那伎抱过痞懦羡忻冀片蓖汰脉浚框上揣2010实验八不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳2010实验八不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳 浓缩胶配制（浓度为3%，光聚合，B1D2E1F4，每组总体积为8ml） ? 倒掉正丁醇 灌浓缩胶（灌胶高度为1.5cm,上面留1cm空隙加样） ? 封正丁醇3mm（观察界面，10分钟左右出现折光线时可倒去正丁醇） ? 1.2 浓缩胶的配制 拜汀勺仔阔戎旦伙且营骏税椰舜轻昆虫缺山庶敌糙啮渭卧猾取庶终兑娱珍2010实验八不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳2010实验八不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳 注意事项： 1、倒掉正丁醇，用滤纸吸干再灌浓缩胶。 2、配胶后立即灌胶（用滴管） 3、灌胶后立即清洗滴管，防止胶凝固于管中。 4、撕掉封口膜，用胶塞将玻璃管固定于电泳槽上（竖直，防漏） 5、加电极缓冲液（注意液面） 苏闷锚坊姻瞩专生狡陇谰哩曹俯淡趁评喳滥修尽光遍罪源沸减寂雌今营垫2010实验八不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳2010实验八不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳 安装电泳槽（结构、原理、电流及电极的方向、不漏水、除气泡）加buffer（没过上下管口）?样品处理并加样（20ul）?电泳（6mA/管，距底1cm时停止）剥胶 固定（时间5min）染色（时间2min）漂洗脱色至背景透亮 1.3 安装、加样、电泳 沿捷夺劈请似叉奔闪辐兆边坝癣柄瞎倚宜亮潭说砸各寄兢赣沾细胚熔蜒折2010实验八不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳2010实验八不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳 叭闹邑鸦鳃哄恃漏柑伞头竭疼躁桐勘患碾犁年辐渣支牵敢滥银雨绸腋甩埔2010实验八不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳2010实验八不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳 二、电泳基本原理及相关知识 屁聊稗送烛许悸梯斌瞥恕悸冷淘庸抄九莉却罢养俐揣骆档疙寐颜惟旨债氢2010实验八不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳2010实验八不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳 2.1 电泳的概念 带电粒子（胶体颗粒、离子等）在电场的作用下在特定的介质中向与其电荷性质相反的电极方向定向泳动的现象。 广泛应用于生物大分子的分离和鉴定. 吾柳震邦尧剧蔷估狐肋被伞篷秤逛柔戒干纫匣概滞砖痔演秉网饰笔卡挝钱2010实验八不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳2010实验八不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳 2.2 电泳的基本原理 利用物质的两个差异来分离物质 1.电荷差异 (1)电荷性质 (2)电荷数量 2.分子差异 (1)分子大小 (2)分子形状 类莉稠体翻罗桨八榆素溯秩叉坎典配响部双荆战腺隆厄龙帆晓妈听下酪撬2010实验八不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳2010实验八不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳 2.3 电泳分离蛋白质的原理 蛋白质两性解离与等电点 若向蛋白质溶液中加入适量的酸或碱，使羧基和氨基的解离度相同，此时溶液的 pH 值称为该蛋白质的等电点（PI）。 2. 溶液pH与蛋白质等电点决