《生理科学实验作业范本》HMOX1、miR122对巨细胞病毒感染小鼠肝癌进程的影响研究.docVIP

HMOX1、miR122对巨细胞病毒感染小鼠肝癌进程的影响研究 朱榕生1 乐辰升2 颜辉2 （1,2 浙江大学医学院2011级临床医学专业1C班第1组，浙江，杭州，310058） [摘要] 目的 研究HO-1基因表达水平对小鼠肝癌细胞生长的影响，并探索miR122与HO-1的关系。 方法 建立小鼠肝癌模型，以小鼠巨细胞病毒CMV毒株感染离体肝癌组织，（1）测量正常肝组织、肝癌组织、病毒感染肝癌组织HO-1的表达水平、miR122的转录水平、肝细胞（肝癌细胞）活性；（2）加入选择性HO-1抑制剂锌原卟啉IX，测量肝癌组织、病毒感染肝癌组织HO-1的表达水平、肝细胞（肝癌细胞）活性；（3）加入miR122特异性沉默RNA，测量正常肝组织HO-1的表达水平。 结果 预期（1）肝癌组织与病毒感染肝癌组织miR122表达水平较正常肝组织为低，细胞活性为高，HO-1表达水平为高，且病毒感染后HO-1表达水平较未感染病毒的肝癌组织为高，上述指标均具有显著性差异（p0.01)；（2）加入选择性HO-1抑制剂后，肝癌组织、病毒感染肝癌组织HO-1表达水平无显著性差异，肝癌细胞活性无显著性差异（p0.05)，但两指标均较正常组织为高（p0.01)；（3）转染miR122过表达载体，三组样本miR122表达均上调，HO-1蛋白含量下降，肝细胞活性下降，且肝癌与肝癌伴MCV感染组肝细胞活性无显著性差异（p0.05)。 结论 肝癌细胞中miR122表达下调，其可能作为HO-1转录的抑制因子而使肝癌细胞HO-1表达上调。上调的HO-1可能与细胞内调控生长的信号之间发生关联，促进细胞增殖分裂，使用HO-1抑制剂可以使肿瘤细胞生长减缓，或可成为肿瘤治疗新靶点。 [关键词] HCMV；MCV；HO-1；miR122；小鼠；肝癌模型 [引 言] 人巨细胞病毒（human cytomegalovirus,HCMV）属于β疱疹病毒亚科，是巨细胞包涵体病的病原体，人群感染十分普遍，但通常为潜伏感染，临床上常无症状。病毒潜伏在唾液腺、乳腺、肾、外周血单个核细胞及其他腺体细胞内[1]，可以通过人体体液分泌排出，在人群中传播。HCMV是引起先天性感染最常见的病毒之一，感染的新生儿有5%~10%出现临床症状，表现为肝脾大、黄疸、血小板减少性紫癜、溶血性贫血及神经系统损伤、小头畸形、智力低下,称之为巨细胞包涵体病（cytomegalic inclusion disease,CID)[1]，大多数病例经抗病毒及对症治疗后痊愈,但是少数严重者可发展为肝硬化、腹水等。在免疫力低下患者，如器官移植、艾滋病、白血病和淋巴瘤等病人中，HCMV常可导致严重感染[2]，可见HCMV对机体的作用受到机体内在免疫力的影响。 机体免疫系统具有免疫监视功能，可识别、杀伤并及时清除体内突变细胞，防止肿瘤发生。当免疫水平下降时，肿瘤发生的风险将大大增加。以往文献研究认为HCMV可能存在潜在致癌性，但是缺乏相关证据[1]。但是，近年来对HCMV的研究发现，HCMV与肿瘤之间存在密切联系。在多种人类肿瘤如宫颈癌、乳腺癌、前列腺癌等组织中检出HCMV DNA。对恶性胶质瘤患者的临床研究发现，HCMV感染的肿瘤细胞数量与肿瘤的恶性程度有关[3]。针对HCMV基因编码蛋白对肿瘤的细胞周期、细胞凋亡、细胞迁移、血管生成、免疫逃避作用已有相关研究[4]，使我们对HCMV与肿瘤之间的关系更为了解。根据目前的研究进展，HCMV主要起到了肿瘤调节作用，例如在协同人乳头瘤病毒（HPV）使人正常鳞状上皮恶变过程中起到了协同作用[5]，病毒编码的即刻早期基因（IE基因）可上调细胞转录因子NFkB，能与p53和RB（一种肿瘤抑制基因编码的蛋白）结合，细胞周期不能终止，从而使细胞增殖、恶化。因此，基于人群中广泛而潜在感染的HCMV，且HCMV在机体免疫低下时对肿瘤可能起到的促进作用，以HCMV为对象，针对HCMV所涉及的某一细胞活动通路为靶点进行干预，可能对肿瘤生长有抑制作用，为临床上癌症的治疗提供新的手段。 原发性肝癌，特别是肝细胞癌（HCC），是临床常见的恶性肿瘤之一。在我国，肝癌的发病率和死亡率甚高。据WHO globe cancer statistics统计[6]，2008年肝癌的全球发病率已超过74.8万，是排名第6位的恶性肿瘤；死亡人数接近69.5万，位居肿瘤相关死亡的第3位。肝癌在我国高发，发病人数占全球的54%，其在肿瘤相关死亡中仅次于肺癌，位居第二。并且，无论是在全球范围内还是在我国，肝癌发病人群中死亡人口高达93%。因此，肝癌严重威胁人类健康和生命。张新华等[7]（1998）在对消化系统恶性肿瘤患者HCMV感染情况的研究中发现肝癌、胃癌、结肠癌患者HCMV感染率高于正常对照。2001年杜冀晖等[8]在乙