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不同品种枇杷果实酚类物质及其抗氧化活性解析 　酚类物质是植物重要的次生代谢产物之一，广泛存在于植物中，影响植物的品质，由于酚类物质结构中携有一个或多个羟基，对自由基有良好的清除能力，表现出很强的抗氧化活性，因而植物酚类物质及抗氧化活性研究成为近年农业科研领域的热点，在枇杷叶、花、核、果已有相关报道。研究表酚类具体的组成及各成分含量与抗氧化能力有很高的相关性，在枇杷花、叶中也得到相同结果，枇杷果实中酚类的组成研究较少，仅张文娜、徐红霞等研究了浙江10 个品种的枇杷果实酚类物质组成，其他品种尚未见报道。福建是枇杷的主产区之一，2013 年年产量达23.7 万吨，主栽的品种有红肉系的“早钟6 号”、“长红3 号”、“解放钟”和白肉系的“白梨”等，本实验以这4种枇杷果实为试材，采用超声波辅助乙醇提取法提取其中的酚类物质，用DPPH 法( DPPH 自由基清除法) 和FRAP 法( 铁还原比色法) 来评价其抗氧化能力，并使用高效液相色谱法分析酚类组成，研究不同品种果实酚类组成与抗氧化性关系，并与已研究较多的“宁海白”比较，以期为枇杷深加工提供科学依据。 　　1 材料与方法 　　1.1 材料与仪器 　　5 种枇杷果实莆田市果树研究所提供，按成熟时间分为早熟的“早钟6 号”，中熟的“长红3 号”和“宁海白”，中晚熟的“白梨”及晚熟的“解放钟”，果实于正常食用成熟度采收，当天运至实验室，选取成熟度一致、无虫害、无明显损伤、果实饱满的枇杷置于-70 ℃超低温冰箱冷冻保存待用; 表儿茶酸、鞣花酸、咖啡酸、阿魏酸、绿原酸美国Sigma 公司; 新绿原酸、隐绿原酸、TPTZ( 2，4，6-反式2-吡啶基三嗪) 、DPPH( 1，1- 二苯基-2- 三硝基苯肼) 上海源叶生物科技有限公司; 甲醇、乙腈色谱纯，国药集团化学试剂有限公司; 其他试剂分析纯; 实验用水超纯水。Agilent 1100 高效液相色谱仪美国Agilent 公司采用紫外检测器ZORBAXSB-C18色谱柱( 150 mmtimes; 4.6 mm，5 mu;m) ; 722- 型可见分光光度计上海光谱仪器有限公司; KQ-100DE 型超声波清洗器昆山市超声仪器有限公司; KDC-40 低速离心机安徽中科中佳科学仪器有限公司; Ultra pure 超纯水机上海和泰仪器有限公司。 　　1.2 实验方法 　　1.2.1 枇杷果实酚类物质提取果实从冰箱取出去皮去核后，果肉迅速切成碎末，准确称取10.000 g，加入30 mL 70%乙醇溶液，浸泡1 h，超声提取20 min( 温度30 ℃，功率200 W) ，再以5000 times; g 的转速离心20 min，减压抽滤得到滤液，滤液用70% 乙醇定容至50 mL，即为枇杷果实提取液，用于测定DPPH·的清除能力和铁离子还原能力及浓缩后用于酚类物质分析。 　　1.2.2 总酚含量测定采用Folin-Ciocaileu 比色法测多酚含量，取1 mL 提取液加入20 mL 水，2.5 mLFoLin-CiocaLteu 试剂，反应5 min 后加入2.5 mL 饱和碳酸钠溶液，最后加水定容至50 mL 静置2 h，于765 nm 波长处测定其吸光度。以没食子酸( GAE) 为标样绘制标准曲线，根据标准曲线计算样品中总酚含量，结果以样品中含有的没食子酸当量( mu;g /g FW)表示。 　　1.2.3 提取液枇杷果实抗氧化能力的测试 　　1.2.3.1 清除DPPH·能力的测定参照文献加以修改，DPPH 乙醇溶液浓度为2.13 times; 10 - 4 mol /L，取等体积的DPPH 溶液和枇杷提取液混合，室温避光反应30 min 后于517 nm 波长处测定其吸光度( Ai) ; 等体积的DPPH 溶液和乙醇混合，测溶液的吸光值( A0) ; 等体积的提取液和乙醇混合，测溶液的吸光值( Aj) 。记录A0，Ai和Aj，按下列公式计算清除率IP:IP( %) =[1-( Ai-Aj) /A0]times; 100。 　　1.2.3.2 铁离子还原力测定参照文献方法测试提取液FRAP 值。取1 mL 提取液，稀释至25 mL。取该稀释液1 mL，加入2.7 mL FRAP 工作液( 20 mmol /L三氯化铁溶液、300 mmol /L 醋酸盐缓冲液、10 mmol /LTPTZ 溶液按1∶ 10∶ 1配制) ，加入6 mL 水，37 ℃下反应10 min 后测定593 nm 处的吸光度。以硫酸亚铁铵溶液为标样绘制标准曲线，以达到相同吸光度所需硫酸亚铁的量来计算样品FRAP 值，单位为mmol /L。 　　1.2.4 枇杷果实提取液的HPLC 分析1.2.4.1 HPLC 检测条件