转基因技术及应用.ppt

第十章 转基因技术与应用 第一节 转基因植物 p85 目的基因和受体的获得 转基因方法 转基因植物的鉴定 转基因植物的应用 转基因植物研究存在的问题 二、转基因植物受体包括： 叶盘、胚轴、茎尖、茎段 原生质体 悬浮细胞 愈伤组织 胚状体 活体 三、转基因方法 直接导入法 物理法：基因枪法、电击法、超声法、显微注射法、激光微束法 化学法：PEG法，脂质包埋法等 载体介导法：农杆菌介导、病毒介导法 花粉管通道法 枪击法 将待转化的DNA沉淀在细小金属珠的表面，用特制枪将金属珠直接打入植物细胞，枪的威力为430 m / s，植物细胞通常是胚胎细胞、玉米籽、叶子等，但进去的DNA片段整合效率极低。 电击法 将高浓度的质粒DNA加入到植物细胞的原生质体悬浮液中，混合物在 200 - 600 V / cm 的电场中处理若干秒钟，然后将原生质体在组织培养基中生长 1 - 2 周，再生出整株植物。 融合法 将外源DNA与特殊的疏水性高分子化合物混合，在水中这些疏水性化合物分子形成球状的脂质体，后者与植物细胞原生质体融合，筛选融合子，再生植物细胞壁。 四、转基因植物的鉴定 选择培养基检测：如Ti质粒改造时插入抗生素标记基因 遗传标记检测：选择标记治理，如含有β-葡糖苷酸酶、荧光素酶基因等 目的基因检测：PCR、分子杂交等 五、转基因植物应用 植物基因改良 抗虫害植物、抗除草剂植物、高品质植物 转基因植物生产药物 生物安全的含义 生物安全使指在一定的时间与空间范围内，由于自然或人类活动引起外来物种迁移，外来物种在定居、建群、繁衍、扩展的连串过程中造成对本土物种和生态系统的威胁、危害，使之衰退，甚至退化和灭绝；或由于人为造成环境的剧烈变化，导致生态环境的破坏或掠夺生物资源，砍伐和捕捞过度，严重时导致物种濒危或灭绝；或由于科学研究、开发、生产和应用中造成对人类健康、生存环境和社会生活的有害影响。 这三种情况均属于生物安全范围，第一种其实是外来物种入侵，或角生物入侵。第二种情况是生态环境的破碎化、片断化和边缘化，同样使生物多样性受到威胁。第三种情况是指生物技术和生物工程引起的生物安全问题，是科技进步带来的负面影响，主要包括转基因农作物的生物安全问题。 生物安全问题的提出与演化 1973年在美国新罕布尔州举行的哥敦会议上（Gordon），在讨论核酸问题时，许多生物学家对即将到来的大量基因工程操作的安全性提出担忧； 1975年2月，在美国加州阿西罗玛（Asilomar）举行了一次国际会议，第一次正式讨论转基因生物的安全性问题； 1976年，美国国立卫生研究院（NIH）发布《重组DNA分子研究准则》，随后，德、法、日、澳等也相继制定了有关重组DNA技术德安全操作指南或准则，经济发展合作组织（OECD）颁布了《生物技术管理条例》，欧盟颁布了《关于控制使用基因修饰微生物的指令》、《关于基因修饰生物向环境释放的指令》等。 1992年6月，联合国环境与发展大会通过《生物多样性公约》，直至2000年1月正式通过《生物安全议定书》。 1993年，国际经济合作与发展组织（OECD）提出转基因食品安全性分析原则是“实质等同性”原则。即转基因食品及其成分应与市场上销售的对应食品具有实质等同性。这种等同性包括表型性状、分子特性、主营养成分及抗营养因子。 2001年5月23日，中国国务院第304号令颁布了《农业转基因生物安全管理条例》。该条例共分8章，分别是总则、研究与试验、生产与加工、经营、进口与出口、监督检查、罚则、附则等。 转基因生物的潜在生态风险 转基因生物的“基因污染”造成生态问题，引起杂草化。 转基因生物对农田生态系统的潜在风险 转基因生物对自然生态系统的潜在风险 转基因生物对健康安全的潜在风险 转基因食品的概念 转基因食品是指那些转入由植物、动物或微生物的细胞中提出的基因，从而获得某些良好特性的生物所制成的食品成为转基因食品或基因改造性食品 转基因作物的种类主要有: 大豆、玉米、棉花和油菜等,这四类作物占全部转基因植物的86%，其中75%种植在北美。 从转基因作物的性状来看,主要有抗除草剂、抗虫、抗病等几类。目前世界上转基因作物种植面积最多的是：抗除草剂大豆种（占转基因植物总面积的40%）；抗虫玉米（占23%）；抗病烟草（占13%）；抗除草剂油菜（占10%）；抗虫棉花（占8%）；抗除草剂棉花（占3%）。 转基因食品的安全性评价 转基因食品的安全性评价是一个很复杂和需要较长时间试验才能得出结论的问题。 转基因食品的安全性应着重从宿主、载体、插入基因、重组DNA、基因表达产物和对食品营养成分的影响几方面考虑。 １ 转基因食品的安全性评价原则 IFBC提出采用判定树（decision-tree）的原则与方法对转基因食品进行安全性评价。 1)了解被评价食品的遗传学