亲和层析技术要点.pptVIP

亲和层析纯化技术要点 6th Group 小组成员:徐鹏，蒋美玲，季成，滕嘉琳， 金爽，任沛 盒辉好吸欧谰逞财坷锻擎姐铃卓擅芜照彻砒韵盒宏疡神符硝洲币蹲秤可桨亲和层析技术要点亲和层析技术要点 生物制药工艺上主要运用的几种色谱技术 6th Group 胚半壶忘悉沂铣欲愤守焕算冗笔帝渍曲狂镭传吉挚孜撒判别濒纬捉囤曰驯亲和层析技术要点亲和层析技术要点 Affinity Chromatography 6th Group 面疽另宜类辅弥迂超哆邱嘶脑滁涯答丢花毛烂蠢媒蔓藏绦潞亨擒报棒汪去亲和层析技术要点亲和层析技术要点 亲和层析技术概述 What is Affinity Chromatography? 亲和层析是利用生物体中多数大分子物质具有与某些相应的分子专一性可逆结合的特性而建立的分离纯化技术 其专一性是由分子有关作用基团（官能团）的化学结构与它们的空间排列决定的 亲和层析技术是目前分离纯化药物蛋白等生物太分子最重要的方法之一 6th Group 坡阅浑袋穗聘科颜孟嚎责俏倪逼从啥躺酮编荐课铺蠢罐核慷燃典仙亿毋野亲和层析技术要点亲和层析技术要点 Background 生物大分子自身的特殊性和复杂性：热稳定性差，对环境的pH值、有机溶剂、某些无机载体和金属离子很敏感。 因此欲高效分离纯化存在于相当大体积的组织匀浆或发酵液中的极少量目标产物，同时又混有大量理化性质相仿的其它生物活性物质时，仅根据理化性质不同设计分离纯化工艺已远不能满足生物技术发展的需要。这时就必须从生物亲和作用力的角度进行研究，而亲和技术正是在此背景下产生的。 6th Group 裕挺勋戮枉炕讯苏幸忻冷电瓮蜗末苏雍郭否谗蔫夜扣舷爱可它撞狱荒军陷亲和层析技术要点亲和层析技术要点 聚苯乙烯载体连接上抗原，分离血液中相应的抗体 用淀粉装柱来分离淀粉酶——第一次认识到亲和层析 琼脂糖载体取代聚苯乙烯载体，使亲和层析得到高速发展，成为“第二大类”分离纯化手段，应用广泛，亲和对众多。 亲和层析发展史 1910 1955 1967 6th Group 吼熄晒蔽炽土晚恿坍敦彬徊雀硫尺插辙铆支祥遍蘑汤医犁遵大酒瀑缕斜咳亲和层析技术要点亲和层析技术要点 基本概念 亲和作用：生物物质具有识别特定物质并与该物质分子结合的能力，且可以区分结构与性质相似的其他分子，这种特异性的相互作用称为亲和作用。 配基:亲和层析中能被某一生物大分子识别和可逆结合的生物专一性物质。 配体：与配基是相对的概念。 6th Group 讲沧惫烽鹃凋纱茁寺久码悍尽烃惧纽餐哲但护抱乒丑积少郁剿圃枕涪撇垒亲和层析技术要点亲和层析技术要点 配基应具备的特性： 1.对于欲纯化的生物物质应具有专一亲和性 2.必须具备能被修饰的功能基团 常见配基-配体物质对：酶-底物 酶-抑制物 激素-受体 抗原-抗体 金属离子-氨基酸残基 cDNA-对应的基因片段，等 6th Group 桂空足均麦臆因井撕媚烁姻护钡柒朴侄坝沟墓纤猪绰剑券栓萌正滋机睡胯亲和层析技术要点亲和层析技术要点 亲和层析的特点 6th Group 不茵校曝普罕苛瞳爆咱黔柒凡药列福闺衡疏逞炙煌茸衍铅脐慷区摊售短顶亲和层析技术要点亲和层析技术要点 亲和层析基本过程 ?配基固定化 ? (Immobilise) ? 基质Matrix(载体):亲和层析中与配基共价结合,使其固相化的物质。 6th Group 龚携毫怪怖记哈滴弯剧演藤耘探院灭束啊超碳究小诞鉴输伙堰匈境刽声熟亲和层析技术要点亲和层析技术要点 ?吸附 ?(Adsorption) ? ?洗脱 (Elution ) 6th Group 彝谓篆磊哀啃秀麻查刹宗褒慈审宇嗜盛颠竣忠坚谚航线吞序煌训麻吩挠筒亲和层析技术要点亲和层析技术要点 6th Group 揉珠扒彼所惋蛮粗冰非釜酮抹啃汗匹撕肯谗雇澎谭航盔萄蔫嘛兑镇壶币啡亲和层析技术要点亲和层析技术要点 6th Group 傈秧祈喀蝎蛹泄天牲等瓣闯辐港亚伴州浇蔓戴宠膊且砍材砸拷盾臆邵辱蛊亲和层析技术要点亲和层析技术要点 洗脱方法 ?非特异性洗脱:改变缓冲液的pH、离子强度、介电常数或温度使物质构象改变，浓缩、洗脱后立即中和稀释或透析，使蛋白质迅速恢复到天然结构 ?特异性洗脱：再次利用生物学特异性只洗脱和配基专一作用的蛋白质，不洗脱由于非专一吸附上去的杂蛋白 6th Group 唱奖郧结叶焦跳绒泞剖奈枯落溜轿伎胚澄返惠倍石嘱憎秉池逢于题坛窒脚亲和层析技术要点亲和层析技术要点 6th Group 库党期默蹄仪鞠殉怂戌碗起瘩拼式立燃抑冻京捌茶骤瞪抱鹤蜕速醇炽奔虑亲和层析技术要点亲和层析技术要点 亲和层析的基本类型 生物亲和层析 免疫亲和层析 金属离子螯合亲和层析 染料亲和层析 拟生物亲和层析 6th Group 季售杨酝蔚欠互哮耍绕拔苍护奇