3腺病毒载体在肿瘤治疗中的应用.pptVIP

* 双启动子 分别调控病毒复制所必需的不同基因。以PSA启动子调控Ad5的E1A，以hK2（human kallikrein 2）的启动子来调控E1B的表达，实现对前列腺癌的双重调控 杂合启动子 由hTERT启动子和CMV最小启动子组成的杂合启动子调控腺病毒E1a区基因表达 * 提高治疗效果的策略 通过改变腺病毒的嗜性增强转导靶向性 构建双衔接分子 该分子可同时与病毒外壳和宿主细胞结合，从而增强腺病毒载体的转导靶向性 病毒抗体：腺病毒纤突、五邻体基质和六邻体壳粒 配体：如叶酸酯、基本的成纤维生长因子（basic fibroblast growth factor, FGF2） 抗体：如表皮生长因子受体的抗体（anti-epidermal growth factor receptor , anti-EGFR）、表皮细胞粘附素抗体（ anti-epithelial cellular adhesion molecule , anti-EpCAM） * 基因工程方法改变腺病毒的嗜性 腺病毒5型，暴露于纤突蛋白之外的HI 环结构备受重视，它可以允许更多得氨基酸片段的插入，约100个，如RGD-4C肽 嵌合的Ad5和Ad3纤突蛋白结构域 能高效地转导CAR低表达的肿瘤细胞； Ad5/3嵌合衣壳能在一定程度上避免体内早已存在的Ad5抗体对腺病毒的中和作用 * 提高治疗效果的策略 肿瘤特异性启动子在转录水平控制外源基因在特定的组织细胞中表达 CRAds中插入外源基因，将CRAds的溶瘤治疗与基因治疗相结合，使其既有对肿瘤的直接杀伤作用，又可以把外源性的治疗基因稳定地转入肿瘤细胞内并大量、持续的表达，从而达到溶瘤-基因治疗的双重目的，这种病毒又被称为“武装后的条件增殖腺病毒”（armed CRAds）。 * 插入的外源基因 自杀基因如胸苷激酶（TK）基因、胞嘧啶脱氨酶（CD）基因 免疫调节因子TNF、IL-2及肿瘤抑制基因P53 报告基因编码荧光蛋白或其他放射性标记蛋白 * 目前面临的问题及展望 由于人体免疫系统的干涉，静脉注射的病毒往往被免疫系统排除殆尽； 腺病毒在实体瘤中的扩散受到限制，这与肿瘤大小、肿瘤中正常细胞比例偏高（某些肿瘤中达50%）、肿瘤细胞中病毒受体表达量低等因素密切相关； 肿瘤细胞具有异质性，病毒对于某些肿瘤细胞的杀伤效果好于其它细胞。 安全性包括溶瘤病毒的毒性、基因修饰后的安全性等，病毒基因治疗中存在野生病毒的回复突变以及病毒在人群之间传播的危险。 * 对已有的策略进行优化 采用多种机制联合进行靶向 病毒与化学方法、放射方法结合治疗肿瘤 * 思考题 腺病毒作为载体的优势及提高腺病毒治疗肿瘤的策略有哪些？ * 因此从基因水平调控细胞的基因表达过程理应成为治疗肿瘤的理想手段。 * 非病毒载体系统，病毒载体系统。 优秀精品课件文档资料 * 条件增殖腺病毒在肿瘤治疗中的策略 条件增殖腺病毒在肿瘤治疗中的策略 微生物教研室　李晓霞 　 * 内　容 基因治疗 分类 主要病毒载体系统 腺病毒载体在肿瘤治疗中的策略 条件增殖腺病毒 现状及策略 基因治疗及分类 * Gene-targeted therapy，以基因为靶点的治疗，将遗传物质导入人体组织或细胞所进行的疾病的治疗 基因治疗 * 历史与回顾 1980年有人提出用磷酸钙介导基因转移来治疗地中海贫血。离体基因治疗 ex vivo 80年代初建立逆转录病毒体系为基因治疗提供高效率的转移载体。 1989年5月22日Rosenberg首次将外源基因-新霉素抗性基因用逆转录病毒导入肿瘤浸润淋巴细胞中。 * 历史与回顾 Anderson于1990年9月4日第一次用于人类疾病的基因治疗，两例由于腺苷脱氨酶缺失导致的免疫缺陷的女孩经逆转录病毒载体将该酶基因导入骨髓而获救，并且存活至今。 2004 年1月，深圳赛百诺基因技术有限公司将世界上第一个基因治疗产品重组人p53 抗癌注射液(商品名：今又生)正式推向市场，这是全球基因治疗产业化发展的里程碑 * 基因治疗分类 根据给药途径和方法 离体基因治疗 ex vivo 原位基因治疗 in situ 体内基因治疗 in vivo * 基因治疗分类 离体基因治疗 ex vivo—将目的基因在体外导入自体或异体来源的肿瘤细胞或其它细胞，再将这些修饰过的靶细胞转入体内。 原位基因治疗 in situ—将目的基因载体直接注射或导入体内的肿瘤组织，进行局部治疗，这也是最主要的方法。 体内基因治疗 in vivo—将目的基因载体注射到血液系统进行全身治疗。 * 基因治疗分类 根据基因导入的方法 裸露DNA直接注射－注射gene gun 脂质体共转化－体外细胞转化 受体介导的基因导入－病毒载体 主要病毒载体系统 * 常用的病毒载体