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氮源对C. vulgaris 油脂积累的影响研究 　　小球藻是一种普生性单细胞绿藻，在自然界分布广泛，营养需求简单，可利用光照进行自养生长，也可利用有机物进行异养生长。藻细胞内含有丰富的氨基酸、藻蛋白、生物多糖和多种维生素、不饱和脂肪酸及矿物质，具有降血脂、降血压，增强免疫力，抗肿瘤等多种保健功能。由于其生长速率，光合效率，比表面积和积累油脂含量高于其他油料作物，而被广泛用于研究微藻油脂的积累。碳、氮、磷和某些金属离子对小球藻的生长和油脂的积累有重要的作用，其中研究较多是氮源因素。氮源是藻类生长发育所必须的重要营养元素，不同的藻种对氮源的要求有差异，氮源的种类和浓度发生变化，会影响微藻，如微藻的生长，油脂含量，脂肪酸成分等生理生化特征的改变。王顺昌等认为尿素有利于蛋白核小球藻的生长及其色素积累，而硝态氮则利于其中性脂肪酸积累。朱义平等发现低浓度NaNO3可使小球藻油脂含量增多; 丙氨酸可促使生物量增多，但油脂含量有所下降; 酪氨酸可降低细胞生物量，但油脂含量较高。Cha等证实在低氮条件下，小球藻产生的油脂含量有所增多。通过研究发酵过程中不同氮源对小球藻细胞生长和油脂积累的影响，确定了小球藻的最适培养条件; 并以此为基础，研究了含氮培养和缺氮培养下，小球藻氮消耗、生物量、油脂含量、生物量对氮得率和相对油脂对氮得率的变化，以探索通过改变氮源，调控小球藻细胞内组分的手段。 　　1 材料与方法 　　1. 1 菌种与培养基 　　小球藻Chlorella vulgaris C95，购自中国海洋大学。BG11 培养基[13] ( g /L) ，NaNO3 1. 50、K2HPO40. 04、MgSO4·7H2O 0. 075、CaCl2·2H2O 0. 036、Citric acid 0. 006、Ferric ammonium citrate 0. 006、EDTANa20. 001; Na2CO3 0. 02、微量元素混合液A5( mg /L) : H3BO3 2. 86、MnCl2·4H2O 1. 86、ZnSO4·7H2O 0. 22、Na2MoO4·2H2O 0. 39、CuSO4·5H2O0. 08、Co( NO3)2·6H2O 0. 058; 无氮BG11 培养基( BG11-N) ( g /L) : 以等浓度的NaCl 替代BG11 中的NaNO3，其他成分等同BG11。 　　1. 2 实验方法 　　1. 2. 1 种子培养 　　挑取固体平板上培养的藻株至含有1 mL BG11培养基的试管中，混匀。取适量接种于含有10 mL培养基的100 mL 三角瓶中，置于恒温光照摇瓶柜中培养，培养条件为: pH 7. 5，温度28 plusmn; 0. 2 ℃，光照强度4 000 lx，以16 h ∶ 8 h 的光周期给予光照，以110r /min振荡培养。 　　1. 2. 2 氮源优化的培养 　　1. 2. 2. 1 添加不同氮源种类的藻细胞培养 　　将培养至对数生长期的藻细胞悬浮液，接种于含200 ml 已灭菌的无氮BG11 培养基( 氮源浓度为0 mg /L) 的500 mL 三角瓶中。分别添加NaNO3、NH4Cl 和CO( NH2)2作为氮源，调整其浓度等同于，采用BG11 培养基培养的氮源浓度( 1. 50 g /L) 。调整初始pH 为7. 5，初始接种浓度为吸光值0. 35 plusmn;0. 05( OD680 nm) ，于温度( 28 plusmn; 0. 2 ) ℃，光照强度4 000 lx，16 h∶ 8 h 的光周期下，培养8 d。 　　1. 2. 2. 2 不同氮源底物浓度下藻细胞的培养 　　将培养至对数生长期的藻细胞悬浮液，接种于含200 ml 已灭菌的无氮BG11 培养基的500 mL 三角瓶中。以C. vulgaris C95 最适氮源种类为氮源，调整氮源浓度，分别为0. 4 g /L、0. 8 g /L、1. 2 g /L 和1. 6 g /L，其他培养条件同方法1. 2. 2. 1。 　　1. 2. 3 含氮培养 　　收集培养至对数生长期的藻细胞，接种于含有200 mL 优化的BG11 培养基的500 mL 三角瓶中。调整初始pH 为7. 5，初始接种浓度为吸光值0. 35plusmn; 0. 05 ( OD680 nm) ，于温度( 28 plusmn; 0. 2) ℃，光照强度4 000 lx，16 h ∶ 8 h 的光周期下，培养6 d。 　　1. 2. 4 缺氮培养 　　收集培养至对数生长期的藻细胞，接种于含有200 mL 的优化BG11-N 培养基的500