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浅谈新的液质联用技术在生物大分子药物中的应用进展 　　从1969 年Tal#39;roze 等首次提出了液相色谱-质谱联用技术( LC-MS)至今已有40 多年的历史。液质联用主要基于质谱技术的发展和适合于液质联用的离子化技术问题。 　　1 质谱法的发展 　　1968 年Dole 首次描述了电喷雾离子化原理，包括电荷残余模型( Charge residue mode，CRM) 。20 世纪80 年代，美国科学家Fenn 改善了Dole 的方法，对质谱离子化技术进行了改进，实现了质谱法的真正突破，使电喷雾离子化( ESI)形成的离子呈复杂的多电荷状态，提高了质子测定的精准度和测量范围。关于电喷雾离子化的机理，1997 年Chen 等和2001 年Cesh 等均已作了描述。 　　液质联用是将液相色谱的分离能力与质谱的定性功能结合起来，实现对复杂体系中的组分进行准确的定量和鉴定，因此质谱仪的结构与液质联用技术的发展密切相关。目前，用于液质联用中的质谱仪主要的有: 四极杆质谱仪( Quadrupole mass spectrometer，Q) ，三重四极杆质谱仪( Triple stage quadrupole mass spectrometer，TQ) ，离子阱质谱仪( Ion trap mass spectrometer，Trap) ，飞行时间质谱仪( Timeof flight mass spectrometer，TOF) ，四极杆飞行时间质谱仪( Quadrupole time of flight mass spectrometer，Q-TOF) 等。1979 年最早出现了离子阱质谱仪，是目前应用较广的质谱仪之一。离子阱质谱仪属于动态质谱，与四极杆质谱仪有很多相似之处，在四极杆内的离子将受x，y，z 三方向电场力的共同作用，使离子能在这3 个力的共同作用下比较长时间的在稳定区域内，犹如一个电场势阱称为离子阱。1986 年Niesson 对用于LC-MS 中液相直接引入的接口曾作了综述。 　　液质联用中由于液相色谱的流速、溶剂及分析样品的性质等与质谱的要求不协调，因而LC-MS 的接口( Interface)成为联用技术的第二重要因素。早期的接口则具有明显的缺陷。后来出现的LC-API-MS 接口则获得了较为广泛的应用，大气压电离( API) 有电喷雾( ESP) 、气动辅助ESP( 或称离子喷雾ESP) 和大气压化学电离( APCI) 3 种模式，其主要特点陈桂良等已作了介绍。 　　2 超高效液相色谱法 　　高超效液相色谱法( Ultraperformance liquid chromatography，UPLC) 是整合液相色谱颗粒技术和色谱使用1. 7 mu;m杂化颗粒色谱串联流体学模块，在较高压下表现出优异性能且系统体积实现最小流路优化的新液相色谱法。UPLC 与HPLC 比较，不仅提高了分辨率，灵敏度有更好的分离度和更高的通量，而且通过提高的峰容量而实现质谱技术的同步发展。以17 种氨基酸分析为例，UPLC 与HPLC 的分离度、灵敏度和分离速度的比较结果。 　　3 创新型四极杆飞行时间质谱仪 　　创新型四极杆飞行时间质谱仪( Xevo G2-SQTof-MS) 。这一质谱仪，其所以称为创新型，主要在于仪器中含StepWave 离子光学系统和采用了定量飞行时间( QuanTof) 技术。Step Wave 使其具有稳定的高灵敏度，以高效率将离子源转移进入质谱仪，同时过滤掉电中性杂质。质量飞行时间技术使其可与UPLC 兼容的质谱高分辨率、可耐受多种基质的动态范围，使质谱仪可在复杂和高强度背景图谱中获得高水平的图谱内线性动态范围，可对复杂体系进行分析并取得可靠的定量结果和精确的质量数据。 　　4 UPLC 与四极杆飞行时间质谱法联用或与创新型四极杆飞行时间质谱仪结合的联用技术 　　UPLC 与四极杆飞行时间质谱法联用( UPLC/Xevo G2-SQTof) 或与创新型四极杆飞行时间质谱仪结合的联用技术( UPLC/Xevo G2-SQTof) 可获得全面高质量信息，可用于复杂体系中各类药物的鉴定，确认和定量分析。对一种单抗蛋白质赫赛汀( Herceptin) 进行分析时，由于Step Wave 的高灵敏度使得0. 1 mu;g 在创新型四极杆飞行时间质谱仪中所得的质谱图质量高于1. 0 mu;g 产生的质谱图。 　　5 超高效液相色谱与四极杆飞行时间质谱法结合的新型液质联用技术 　　治疗性蛋白质药物其糖基化作用特别重要，因为这类药物在临床有效起着维持生命的作用，而超高效液相色谱( UPLC) 与四极杆飞行时间质谱