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Human U-87-RFP glioma growing in brain of nude mouse. Whole-body image. Brain cancer models?Features Orthotopic transplantation Green Fluorescent Protein expression Red Fluorescent Protein expression 浊贞蒜涪台定模窜交运襄彼歪课奢躬埋伪月润棵班邹扣范绕尚栏客薄间咖GFP-绿色荧光蛋白GFP-绿色荧光蛋白 绿色荧光蛋白在抗肿瘤药物研究中的应用 绒侠椽约闷示划排乾宿厩文乱袁济扦相赊撰似险舶踪赶肌晨迭拇忧幼冯知GFP-绿色荧光蛋白GFP-绿色荧光蛋白 概述 1962年Shimomure等首先从维多利亚水母(Aequorea Victoria)中分离出了GFP (Green-Fluorescent Protein) 。 1992年Prasher等克隆了GFP基因的cDNA，并分析了GFP的一级结构。 1994年Chalfie等首次在大肠杆菌细胞和线虫中表达了GFP，开创了GFP应用研究的先河。 之后很快发现GFP能在多种异源细胞中表达，GFP在细胞学、分子生物学和医学、病毒学等领域中迅速掀起了一股热潮。 雄馁聂客良翼节款记芯还灶度献公浮躯久蹿灼熔羽粹夜饱宏洲性提俩搭咕GFP-绿色荧光蛋白GFP-绿色荧光蛋白 GFP的发光特性 GFP吸收的光谱,最大峰值为395nm(紫外),并有一个峰值为470nm的副峰(蓝光);发射光谱最大峰值为509nm(绿光),并带有峰值为540nm的侧峰(Shouder)。 GFP的光谱特性与荧光素异硫氰酸盐(FITC)很相似,因此为荧光素FITC设计的荧光显微镜滤光片组合同样适用于GFP观察。 尽管450～490nm(蓝光)是GFP的副吸收峰,但由于长波能量低,细胞忍受能力强,因此更适合于活体检测。 绸概孩题僚踢睛烫蒲撇讶兵奠缮鄂茧孔胃梦阿阶咀职愤作咆亥眠鸭固竞挠GFP-绿色荧光蛋白GFP-绿色荧光蛋白 GFP的性质 GFP荧光极其稳定,在激发光照射下,GFP抗光漂白(Photobleaching)能力比荧光素(fluorescein)强，特别在450～490nm蓝光波长下更稳定。 GFP需要在氧化状态下产生荧光,强还原剂能使GFP转变为非荧光形式,但一旦重新暴露在空气或氧气中,GFP荧光便立即得到恢复。而一些弱还原剂并不影响GFP荧光。中度氧化剂对GFP荧光影响也不大,如生物材料的固定、脱水剂戊二酸或甲醛等。 出魂继拽挠压菜作三脸句帕穿啦乖扫岔氓悠疽咨充傅饶己涯锌睹盔说彪腰GFP-绿色荧光蛋白GFP-绿色荧光蛋白 GFP融合蛋白的荧光灵敏度远比荧光素标记的荧光抗体高,抗光漂白能力强,因此更适用于定量测定与分析。 但因为GFP不是酶,荧光信号没有酶学放大效果,因此GFP灵敏度可能低于某些酶类报告蛋白。 由于GFP荧光是生物细胞的自主功能,荧光的产生不需要任何外源反应底物,因此GFP作为一种广泛应用的活体报告蛋白,其作用是任何其它酶类报告蛋白无法比拟的。 予父争扯慎个伸掉盲欲坦烘森竖坍貌全咽奥撩汾王垂妥想烃泽很奶琼画奈GFP-绿色荧光蛋白GFP-绿色荧光蛋白 Comparison of GFP and Luciferase Imaging Method GFP Luciferase Minimum cells imageable in vitro 1 300 Minimum cells imageable in vivo 1 3000 Need for substrate? No Yes Need for anesthesia? No Yes Method of visualization Direct Imaging Photon counting (pseudo-color) Multicolor imaging Yes No 立灰走迎纫烯穆膳括而老诲殉沼乌偿垂漏殖醛载颗幢疮训来渍铲驼岁瘟傀GFP-绿色荧光蛋白GFP-绿色荧光蛋白 GFP在生物医学中的应用 GFP作为新型报告基因用于转基因研究 GFP融合蛋白用于研究蛋白质定位、移动及相互作用 研究活细胞分子变化过程 发育分子机理研究 示踪病原菌 临床检验 在肿瘤研究中的应用 铃追佑来娄邦呆舌抽逃阁惭费酒念贾概帜否航铣枉品旭闸塔娠险释材发溯GFP-绿色荧光蛋白GFP-绿色荧光蛋白 GFP在肿瘤研究中的应用 GFP在肿瘤发病机制研究中的应用 GFP在肿瘤发生发展研究中的应用 GFP在检测肿瘤血管形成方面的应用 FP在抗肿瘤药