电化学传感器(完).docVIP

酪氨酸酶的提取催化活性及生物电化学传感器的构建与应用 顾新 0909401008 苏州大学材料与化学化工学部 09级化学类 摘要：通过测定在不同浓度酪氨酸酶的作用下多巴红的生成速率测定酶的活 性。用加入Na2EDTA观察抑制剂对酶活性的影响。酶电极的制作以及对酚的 测定。结果表明：加入抑制剂后酶的催化活性降低。在邻苯二酚加入的瞬间 有明显的峰电流产生，说明酪氨酸酶促进酚的氧化。 关键词：酪氨酸酶 多巴红 酶电极 电化学传感器 Abstract: Measuring the enzymatic activity through measuring the produce rate under different density of tyrosinase .Adding the Na2EDTA to the liquor and observing the effect. Making the enzymatic electrode pole and measuring the effect to the phenol. The results showed that tyrosinase promote the oxidation of phenol. Key words: tyrosinase dopamine red enzyme electrode electrochemical sensor 1、前言 生物体内由于生物催化剂酶的存在许多复杂化学反应可以在温和条件下进行得十分顺利和迅速，且酶催化反应具有高效性，选择性，反应条件温和等特性。生物传感器是利用生物物质作为识别元件，将被测物质的浓度与可测量的电信号关联起来，其中研究最多的是酶传感器。 生物电化学传感器的构建主要包括酶，碳纳米管的应用。生物传感器具有不需样品处理操作简便，体积小可实现连续在线监测等特点。 本实验通过土豆提取酪氨酸酶，并测定其活性，并将酶进一步固定于电极表面，制成酶电极，可用于酚的测定。 2、实验部分 2.1仪器和药品 仪器：分光光度计；离心机；粉碎机；超声波清洗器；铂电极；饱和甘汞电极；玻碳电 极 药品：L-多巴；磷酸氢二钠；氢氧化钠；盐酸；Na2EDTA；盐酸；多壁碳纳米管；酚 材料：土豆 2.2实验步骤 2.2.1 酶的提取 12.5g经过冰冻切碎的土豆，加入冰冷的25mL磷酸缓冲溶液（pH=7.0）,用粉碎机粉碎均匀。倒出提取液，立即离心分离。倾出上层清夜保存于冰箱。提取液为棕色，在放置过程中不断变黑。 2.2.2酶的活性测量 取0.4mL土豆提取液，加2.6mL pH=7.0的缓冲液。加2mL0.010mol/L的多巴溶液，摇匀。反应约10min后，使用比色皿中，加入m的比色皿，使用自动扫描分光光度计扫描获取多巴红得吸收光谱。并可从混合开始以时间间隔1min进行连续扫描，观察吸光度随时间增加的现象。 取2.5mL提取液用pH=7.0的缓冲溶液稀释至10mL,摇匀。取0.1mL稀释过的提取液于2.9mL pH=6.0的缓冲液，再加2mL多巴溶液，同时开始计时，用分光光度计在475nm处测定吸光度。开始6min内每分钟读1个数，以后隔2min读1个数，直至吸光度变化不大为止。 取0.2mL、0.3mL、0.4mL已稀释过的提取液重复上述实验，（注意总体积为5mL，每次换溶液洗比色皿只能倒很少量溶液洗1次）。 以吸光度对时间作图，从直线斜率求出酶的活性。 2.2.3抑制剂的影响 取0.4mL稀释过的提取液，加入少量固体Na2EDTA振动混合，反应一段时间后，配成测定溶液观察现象。并按上述实验方法，测定酶的活性，并对实验结果进行对比。 1.2.4酶电极以及样品中酚的测定 将酶电极置于0.05mol/L的磷酸盐缓冲溶液（pH=7.0）中，电磁搅拌溶液，在极化电位-0.1V下记录电流-时间曲线，待基本电流稳定后，多次加入一定量的酚溶液，并观察所得曲线。 2.2.4酶电极的制备 将玻碳电极用3000目的进口细砂纸湿磨抛光，然后依次用稀HCl，无水乙醇，去离子水清洗各3min，干燥后备用。 取6μL碳纳米管悬浊液滴加于预处理后的玻碳电极表面，红外灯烘干，再取一定量的酪氨酸酶溶液滴在电极表面，室温下放置干燥3h即可。酶电极不使用时可存放于冰箱中。 2.2.5样品中酚的测定 将酶电极置于0.05mol/L的磷酸盐缓冲溶液（pH=7.0）中，电磁搅拌溶液，在极化电位-0.1V下记录电流-时间（i-t）曲线，待基本电流稳定后，多次加入一定量的标准酚溶液，以电流增量对酚的浓度作工作曲线。 3.结果和讨论 3.1吸光度随时间的变化 表1 不同时间吸光度的变化 时间 吸