表面微生物测试操作规程20170123.doc

表面微生物测试操作规程 ZLSOP表面微生物测试操作规程 执行日期 起草 审核 批准 部门 质控部 质控部 质保部 质量技术副总 姓名 张淑萍 周里欣 李海军 章运典 签名 日期 分发部门 质量控制部 1 目的：建立洁净室（区）表面微生物测试操作规程，确定洁净区中物体（包括工作服）表面微生物污染的程度以及洁净区的消毒效果。 2 适用范围：适用于公司洁净室（区）、无菌室和净化工作台的表面，洁净室（区）设备表面，进入洁净室区人员表面。日常动态检测和空气净化系统确认时的检测。 3 责任者：质量控制部、质量保证部、化验员、负责洁净区洁净度动态测试的质监员。 内容 1 测试方法：接触平皿法、棉签擦拭法、表面冲洗法。测试方法必须考虑取样的准确性和代表性，可以从定性和定量来选择。 1.1 接触平皿法：只适用于规则物体的表面。 1.2 棉签擦拭法：适用于平皿接触法不适用的设备和不规则表面的取样。棉质和涤纶棉签可以浸入到肉汤培养基内得到定性结果。 1.3 表面冲洗法：当需要确定设备表面的生物载荷时，或面积较大时。用无菌水来冲洗内表面，然后收集、膜过滤后得到定量结果。 2 仪器、用具与培养基： 2.1 仪器：电热恒温干燥箱、压力蒸汽灭菌器、药物天平、冰箱。 2.2 用具：培养皿（ф55mm×18mm的培养皿） 2.3 培养基：大豆酪蛋白琼脂培养基（TSA）。 3 操作前准备及要求 3.1 培养基平皿的制备 3.1.1 培养皿的清洗与灭菌：取培养皿，用饮用水清洗，凉干后浸入清洁液中，浸泡12小时以上，用饮用水冲洗干净，再用纯化水冲洗三遍，置铁筒等密闭容器内，121℃湿热灭菌20分钟，备用。 3.1.2 培养基的制备：称取大豆酪蛋白琼脂40g，置2000ml烧杯中，加水1000ml，置电热炉上，加热煮沸使溶解，滤过，分装于500ml三角瓶中，用棉塞把瓶口塞好，包扎牛皮纸，在121℃湿热灭菌15分钟，备用。 3.1.3 培养基平皿的制备：将培养基加热熔化，冷却至约45℃时，在无菌操作下取培养基约10ml，注入无菌培养皿中，加盖后室温放至凝固，制备后培养基平皿在2℃～8℃存放。使用前应仔细检查每个培养皿的质量，培养皿及培养基有变质、破损或污染的不能使用，存放时间不得超过一周。 3.3.2 表面微生物检测人员穿戴与生产区空气洁净度级别相适应的工作服，按照《微生物检查实验室管理规程》进入洁净室（区），外面的衣服不能带进洁净区，盛装培养皿的容器从物流通道或传递窗进入洁净区。 4 测试状态： 4.1 洁净室(区)已处于正常生产状态，设备在指定的方式下运行，并且有指定的人员按照规范操作。 4.2 洁净室（区）的温度和相对湿度：温度应控制在18～26℃，相对湿度控制在45%～65%之间。 4.3 压差：洁净区与非洁净区之间，不同级别洁净区之间的压差应当不低于10帕斯卡，产尘量大的操作间对相邻房间应保持相对负压。 5 取样 5.1 取样点数目及其布局应根据以下几个方面设置： 空调系统初始确认的结果；房间（或区域）的大小和布局；房间（或区域）的用途；与暴露产品的距离，人流物流方向等。对于同一洁净区或区域，每个相同取样物体应采1个样。 5.2 取样方法及步骤 5.2.1 培养基平皿进入洁净室 培养基平皿随检测人员进入一更后缓冲间，检测人员换洁净工作鞋、洗手消毒后，用蘸有75%乙醇溶液的丝光毛巾擦拭盛放培养基平皿的铁桶外表面，进入二更室，检测人员按照相应更衣程序更衣后，进入二更后缓冲间，手消毒后，再用蘸有75%乙醇溶液的丝光毛巾擦拭盛放培养基平皿的铁桶外表面，烘干，即可进入C、D级洁净区使用；培养基平皿在进入A级洁净区前应先将盛放培养基平皿的铁桶置紫外灯下灭菌20min。 5.2.2 取样方法 5.2.2.1 A级洁净区检测人员戴上无菌手套，将密闭铁桶放置于A级环境下，打开铁桶盖，取出所需数量的培养基平皿后盖上铁桶盖，取出的培养基平皿其中1只平皿不打开平皿盖，正放在A级环境下作为空白对照。为检测培养皿运输或搬动过程中培养基是否受到污染，另取3只培养基平皿作为空白对照。其余平皿进行下列取样操作： 5.2.2.1.1 设备环境取：样在关键生产操作完成后，打开培养基平皿，将培养皿扣在灌装机表面，使培养基与灌装机表面接触，10s后盖盖，在取样培养皿外编号标识，将培养皿放回密闭铁桶内。采样结束后立即用注射用水及消毒剂对取样部位清洗消毒。 5.2.2.1.2 人员取样：在关键生产操作完成后，对在A级环境下的操作人员进行五指手套取样。打开培养皿，使操作人员五指轻轻按在培养基表面，10s后盖盖，在取样培养皿外编号标识，将培养皿放回密闭铁桶内。取样结束后在空白对照培养皿外编号标识，将空白对