纯化水微生物限度检查法验证方案.doc

纯化水微生物限度检查法验证方案 1. 验证目的： 纯化水微生物限度试验采用薄膜过滤法检查。确认该方法适合于纯化水细菌、霉菌及酵母菌数测定。 2.职责 2.1验证委员会：负责验证方案及报告的批准并组织协调验证工作并签发验证证书。 2.2.验证组长 2.2.1.负责验证方案的起草 2.2.2.负责验证的协调工作，以保证本验证方案的顺利实施。 2.2.3.负责验证报告的审批。 2.2.4.负责发放验证证书。 2.2.5.负责再验证周期的确认。 2．3. 质保部 2．3.1.负责验证方案审核 2．3.2.负责取样及对样品的检验 2．3.3.负责收集验证记录，并加以分析后，起草验证报告。 2．3.4.负责验证数据及结果的审核 按照我们现在现有的验证方案进行修改 3. 参照标准： 2010版中国药典二部附录XI J微生物限度检查法。 4. 验证项目： 细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证。 5. 合格标准： 试验组的菌回收率和稀释剂对照组的菌回收率均不得低于70%。 6. 试验材料： 6.1. 被验证产品： 品名 纯化水 取样点 总出水口 总回水口 R502（管道最后一个出水口） 检验量 5ml 6.2. 仪器设备： 6.2.1. SYQ/ZDX-35B1型自动座式压力蒸汽灭菌器 6.2.2. YOKO-ZX紫外分析暗箱 6.2.3. SW-EJ-2FB双人净化工作台 6.2.4. 101-2A电热鼓风干燥箱 6.2.5.SPX-250B型生化培养箱 (23～28℃) 6.2.6.PHW-200S恒温培养箱(35～37℃) 6.2.7.CR-50×50×65数显隔水式恒温培养箱(30～35℃) 按照我们的仪器设备修改参数 6.3. 稀释剂： 0.9%无菌氯化钠溶液 6.4. 验证用培养基 名称 生产厂家 批号 营养琼脂培养基 营养肉汤培养基 玫瑰红钠琼脂培养基 改良马丁培养基 改良马丁琼脂培养基 到研发寻找培养基，填上生产厂家和批号 6.5. 验证用菌株：(第3代) 验证菌株 培养基 培养温度 培养时间（小时） 大肠埃希菌 营养肉汤 30—35℃ 金黄色葡萄球菌 营养肉汤 30—35℃ 枯草芽孢杆菌 营养肉汤 30—35℃ 白色念珠菌 改良马丁培养基 23—28℃ 黑曲霉菌 改良马丁琼脂培养基 23—28℃ 7. 菌液制备 7.1. 取经35～36℃培养18~24小时的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、与枯草芽孢杆菌营养肉汤新鲜培养物1ml加入到9ml0.9%无菌氯化钠溶液中，10倍稀释至10-6~10-7约为50~100cfu∕ml的菌悬液备用。 7.2.取经24～25℃培养24~48小时的白色念珠菌改良马丁液体培养物1ml加入到9ml0.9%无菌氯化钠溶液中，10倍稀释至10-5约为50~100cfu∕ml的菌悬液备用。 7.3.取经24～25℃培养一周的黑曲霉菌斜面培养物，加0.9%无菌氯化钠溶液10ml将孢子洗脱，然后吸出孢子悬液，用垫有脱脂棉的漏斗（湿热灭菌）过滤，除去菌丝，收集孢子悬液至另一无菌试管内作为菌原液，取此孢子悬液0.1ml加到9.9ml0.9%无菌氯化钠溶液中，稀释至10-5约为50~100cfu∕ml的菌悬液备用。 8.菌液计数：（每种菌液接种2个平皿） 大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌与枯草芽孢杆菌分别划线接种至营养琼脂培养基，置35～36℃培养二天；白色念珠菌、黑曲霉分别划线接种至玫瑰红钠琼脂培养基，置24～25℃培养三天。 菌落计数结果（2个平皿计数取平均值）见下表 菌落计数结果（cfu∕ml） 试验次数 10-5稀释 10-6稀释 10-7稀释 1 2 3 1 2 3 1 2 3 大肠埃希菌 87.5 85 金黄色葡萄球菌 107.5 111.5 枯草芽孢杆菌 92.5 99.5 白色念珠菌 76 79 黑曲霉 51 50 9.验证方法： 细菌、霉菌及酵母菌计数方法的验证至少应进行3次独立的平行试验，并分别计算各试验菌每次试验的回收率。 9.1.验证日期 9. 2.供试品名称及取样点： 纯化水 取样点 总出水口 总回水口 R502（管道最后一个出水口） 9.3. 供试品制备 方法建立: 2010版中国药典规定纯化水微生物限度试验采用薄膜过滤法检查。但没规定取样量，由于所使用的滤膜孔径不大于0.45um ，直径为50mm， 规定每片滤膜上的菌落数应不超过100个。如果取