乳糖微生物限度检查方法验证.doc

乳糖微生物限度检查方法验证方案 ########有限公司 乳糖微生物限度检查方法验证方案批准 编号：############ 内容 项目 职位/姓名 签名 日期 起 草 人 审 核 人 审 核 人 审 核 人 批 准 人 验证目录 1 引言 1. 1 概述 1. 2 验证小组成员 2 药品名称 3 试验用菌种要求与类别 4 培养基 5 试液 6 验证方法依据 7 操作方法 8 结论 1 引言： 1. 1 概述：按照国家食品药品监督管理局规定，要求产品的微生物限度检查方法必须依照产品进行方法学验证。在辽宁省药品检验所抗生素室专家的指导下制定了乳糖微生物限度检查方法验证方案。 开始日期： 年 月 日 结束日期： 年 月 日 验证部门：化验室 1. 2 验证小组成员 人员 职务 职责 QC主任 起草并组织实施 化验员 实验操作 化验员 实验操作 质量部 资料整理 2 药品名称：乳糖 产品批号： 生产企业：沈阳利得尔化工制剂技术有限公司 曲阜市天力药用辅料有限公司 3 试验用的菌种要求与类别： 要求：验证试验所用的菌株传代次数不得超过五代。 类别：①大肠埃希菌 [CMCC（B）44 102] ②金黄色葡萄球菌 [CMCC（B）26 003] ③枯草芽孢杆菌 [CMCC（B）63 501] ④白色念珠菌 [CMCC（B）98 001] ⑤黑曲霉 [CMCC（B）98 003] 4 培养基： ①胆盐乳糖培养基 ②改良马丁培养基 ③改良马丁琼脂培养基 ④营养肉汤培养基 ⑤营养琼脂培养基 ⑥玫瑰红钠琼脂培养基 ⑦伊红美兰琼脂培养基 5 试液： PH7.0氯化钠-蛋白胨缓冲液 配制方法：取磷酸二氢钠3.56g、 磷酸氢二钠7.02g、氯化钠4.4g、蛋白胨1g、加纯化水1000微热熔解，分装，121℃高压灭菌20分钟。 6 验证方法依据： 《中国药典》2010年版二部，有关微生物限度检查方法验证试验 7 操作方法： 7. 1 菌液制备 （1）取经 37℃培养18-24℃，金黄色葡萄菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的肉汤培养物1ml+9ml 0.9﹪无菌氯化钠溶液，10倍稀释至10-5-10-7，细菌数约为50-100cfu/ml，做活性菌计数备用。 （2）取经 25℃ 培养18-24小时的白色念珠菌改良马丁培养物1ml+9ml 0.9﹪无菌氯化钠溶液，10倍稀释至10-5-10-7，细菌数约为50-100cfu/ml，做活性菌计数备用。 （3）取经 25℃ 培养1周的黑曲霉斜面培养物，加3-5ml0.9﹪无菌氯化钠溶液，将孢子洗脱，然后，吸储孢子悬液（用管口带有薄的无菌棉花或纱布能过滤菌丝的无菌毛细管）至无菌管内，吸取1ml+9ml 0.9﹪无菌氯化钠溶液，10倍稀释至10-5-10-7，细菌数约为50-100cfu/ml，做活性菌计数备用。 7. 2 供试液储备 称取样品10g，加0.1﹪蛋白胨氯化钠稀释液（PH70）90ml浓度均为1:10 供试液，分别人工污染上述5种代表试验菌株。 7. 3 回收率测定 （1）试验组 取1:10供试液1ml和50-100个/ml试验菌株同时加入平皿中，立即倾注琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，待凝固后，置规定温度培养24-72小时观察结果。 （2）菌液组 测定所加的试验菌数。 （3）供试品对照组 测试供试品本底菌数。 （4）稀释剂对照组 稀释液1 ml和50-100个/ml试验菌。 7. 4 控制菌检查方法的验证 （1）试验组 取供试品液10ml及10-100cfu/ml大肠埃希菌加入增菌培养基中，依相应控制菌检查法进行测定。 （2）取供试品液10ml及10-100cfu/ml金黄色葡萄球菌加入增菌培养基中，依相应控制菌检查法进行测定。 7. 5 结果 （1）结果、按上述做四组试验，在规定的条件下培养后计数，计算回收率，回收率不得低于70%。 稀释剂对照组的回收率=稀释剂对照组平均菌落数/菌液组平均菌落数 试验组的回收率=（试验组平均菌落数-供试品对照组）/菌液组平均菌落数 （2）常规法结果，在乳糖微生物限度