1菊花的组织培养题库.pptx

专题3 植物组织培养技术 一、基础知识 （1）细胞的分化 ①概念： 在个体发育中，由一个或一种细胞增殖产生的后代，在形态、结构、生理功能上发生稳定性差异的过程 ②过程： 1、植物的组织培养的基本过程 ③特点： （2）稳定性： （1）持久性： 一般来说，分化了的细胞将一直保持分化后的状态，直到死亡 （3）普遍性： ⑤原因： ④结果： 形成不同的细胞和组织 基因的选择性表达的结果 （2）细胞的全能性 ①定义： 已经分化的细胞，仍然具有发育成完整个体的潜能 ②原理： 生物体的每一个细胞都包含有该物种所特有的全套遗传物质，都有发育成为完整个体所必需的全部基因 已分化的植物细胞，仍具有全能性 ③实例 受精卵生殖细胞体细胞 ④全能性的比较: 高度特化的动物细胞，从整个细胞来说，全能性受到限制。但它的细胞核仍然保持着全能性，这是因为细胞核内含有该物种遗传性所需要的遗传物质 （3）植物组织培养 细胞离体 ①必要条件： 一定的营养物质、激素和其他外界条件 ②原理: 细胞的全能性 外植体：离体的器官、组织、细胞 ③相关概念: 脱分化： 再分化： 由高度分化的植物组织或细胞产生愈伤组织的过程。也叫去分化 脱分化产生的愈伤组织继续进行培养，又可以重新分化成根或芽等器官的过程 愈伤组织: 细胞排列疏松而无规则,是高度液泡化的、成无定形状态的薄壁细胞 人参的愈伤组织 菠萝的愈伤组织 脱分化 再分化 2、影响植物组织培养的因素 （1）植物材料的选择 烟草和胡萝卜的组织培养较为容易 枸杞愈伤组织的芽诱导比较难 B、同一植物材料的年龄、保存时间的长短会影响实验结果 菊花的组织培养一般选择未开花植株的茎上部新萌生的侧枝 A、植物材料的选择直接关系到实验的成败 （2）不同的离体组织和细胞对营养、环境等条件的要求相对特殊，需配置适宜的培养基 MS培养基主要成分包括： A、大量元素: N、P、 S 、 K、Ca、Mg等 B、微量元素:B、Mn、Cu、Zn、Fe、Mo、I、 Co等 C、有机物、植物激素 ①常用的植物激素：生长素、细胞分裂素和赤霉素 生长素类： 2，4－二氯苯氧乙酸（2，4－D）、吲哚乙酸（IAA）、萘乙酸（NAA）、吲哚丁酸（IBA） 细胞分裂素类： 激动素（KT）、6－苄基嘌呤（ 6－BA）、玉米素（ZT） 赤霉素类： 赤霉酸（GA3） （3）植物激素的影响 ②生长素和细胞分裂素作用 植物中生长素和细胞分裂素是启动细胞分裂、脱分化和再分化的关键性激素。在生长素存在的情况下，细胞分裂素的作用呈现加强的趋势 使用顺序 实验结果 先使用生长素，后使用细胞分裂素 有利于细胞分裂，但不利分化 先使用细胞分裂素后使用生长素 细胞既分裂也分化 同时使用 分化频率高 有利于根的分化 有利于芽的分化，抑制根的分化 促进愈伤组织生长 ③生长素和细胞分裂素同时使用，用量的比例对植物细胞发育方向的影响 （4）pH、温度、光照 pH控制在5.8左右，温度控制在18－22。C,每日用日光灯照射12h 3、植物组织培养过程: 离体组织或细胞 植物体 细胞分裂素≈生长素 愈伤组织 芽 根 细胞分裂素生长素 细胞分裂素生长素 植物细胞培养 不需要光 需要光 1、培育无病毒植株 2、 培养紫草愈伤组织,提取紫草素（治疗烫伤和割伤的药物以及染料和化妆品的原料） 4、基因工程中亦需用到植物组织培养的方法 4、植物组织培养的应用： 3、诱导离体的植物组织形成具有生根发芽能力的胚状结构，包裹上人造种皮，制成人工种子，可以解决有些作物品种繁殖能力差，结子困难或发芽率低等问题 二、实验操作 （一）制备MS固体培养基 MS培养基包括20多种营养成分，实验室一般使用40C保存配制好的培养基母液来制备 1、配置各种母液 ①无机物中大量元素浓缩10倍，微量元素浓缩100倍，常温保存 ③用母液配制培养基时，需要根据各种母液的浓缩倍数，计算用量 ②激素类、维生素类以及用量较小的有机物一般可按1mg/ml的质量浓度单独配制成母液 2、配置培养基 分装到锥形瓶中，每瓶分装50ml或100ml ① 配制培养液 ② 调PH ③培养基的分装 由于菊花的茎段的组织培养比较容易，因此不必添加植物激素 3、灭菌 分装好的培养基连同其他器械一起进行高压蒸汽灭菌 1、选材：菊花茎段，取生长旺盛的嫩枝 （二）外植体消毒 2、消毒 ①流水冲洗 菊花茎段用流水冲洗后可少许洗衣粉，用软刷轻轻刷洗，刷洗后在流水下冲洗20min左右 ② 酒精处理 用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入体积分数为70％的酒精中摇动2－3次，持续6－7s，立即将外植体取出，在无菌水中清洗 ③消毒液处理 取出后用无菌吸水纸吸干外植体表面的水分，放入质量分数为0.1％的氯化汞溶液中1－2min，取出