第九章细胞骨架课稿.ppt

第一节、微丝与细胞运动 微丝又称肌动蛋白丝(actin filament), 是指真核细胞中由肌动蛋白(actin)组成、直径为7nm的骨架纤维。在不同类型的细胞内，甚至是在同一细胞的不同部位与之结合的不同的微丝结合蛋白赋予了微丝网络不同的结构特征和功能。 一、微丝的组成及其组装 二、微丝网络动态结构的调节与细胞运动 三、肌球蛋白：依赖于微丝的分子马达 四、肌细胞的收缩运动 一、微丝的组成及其组装 结构与成分 微丝的组装及动力学特征 影响微丝组装的特异性药物 四、肌细胞的收缩运动 肌纤维的结构(以骨骼肌为例) 原肌球蛋白(tropomyosin, Tm)由两条平行的多肽链形成α-螺旋构型,位于肌动蛋白螺旋沟内,结合于细丝, 调节肌动蛋白与肌球蛋白头部的结合。 肌钙蛋白 (Troponin, Tn)为复合物，包括三个亚基：TnC(Ca2+敏感性蛋白) 能特异与Ca2+结合; TnT(与原肌球蛋白结合); TnI(抑制肌球蛋白ATPase活性) 肌肉收缩的滑动模型 肌球蛋白马达结构域包含一个微丝的结合位点和一个具有ATP酶活性的ATP结合位点，沿微丝向正极进行运动(myosin Ⅵ除外）。 用胰蛋白酶处理肌球蛋白分子，可产生轻酶解肌球蛋白（LMM)和重酶解肌球蛋白（HMM)；重酶解肌球蛋白经木瓜蛋白酶处理，形成肌球蛋白头部（HMM-S1)和杆部（S2)。 肌球蛋白的尾部可以和某些特殊类型的膜泡结合，并沿微丝轨道移动； 或与细胞质膜结合，牵引着质膜和皮层肌动蛋白丝作相对运动，从而改变细胞的形状。 结构与成分 微丝的结构成分是肌动蛋白(actin), 在细胞内有两种存在形式，即肌动蛋白单体（又称球状肌动蛋白，G-actin，外观呈碟状结构）和由单体组装而成的纤维状肌动蛋白（F-actin）。 肌动蛋白在生物进化过程中是高度保守的，为多基因所编码。α-肌动蛋白存在于各种肌细胞中，组成细胞的收缩性结构；β-肌动蛋白位于细胞的边缘；γ-肌动蛋白与张力纤维相关。 在电镜下 F-actin 呈双股螺旋状。具有裂口的一端为负极，而另一端为正极。 微丝的组装及动力学特性 在体外，微丝的组装／去组装与溶液中所含肌动蛋白单体的状态、离子的种类及浓度等参数相关联。 MF是由G-actin单体形成的多聚体，肌动蛋白单体具有极性, 装配时呈头尾相接, 故微丝具有极性，有正极与负极之分。 组装可分为成核反应、延长期和稳定期三个阶段。 成核过程需有肌动蛋白相关蛋白Arp2/3复合物的参与，在该复合物内Arp2 和Arp3与其他5种蛋白相互作用，形成一段可供肌动蛋白继续组装的寡聚体。 体外实验表明，微丝正极与负极都能组装，组装快的一端为正极，慢的一端为负极；去组装时，同样正极比负极快。 在微丝组装时，若G-actin 添加到F-actin上的速率正好等于G-actin 从F-actin失去的速率时，微丝净长度没有改变，这种过程称为踏车行为。它是由G-actin 单体的临界浓度决定的。 体内组装时，MF呈现出动态不稳定性，主要取决于F-actin结合的ATP水解速度与游离的G-actin单体浓度之间的关系。 影响微丝组装的特异性药物 细胞松弛素B(cytochalasin B)：是真菌分泌的生物碱，与微丝结合后可以将微丝切断，并结合在微丝末端阻断肌动蛋白在该部位的聚合，但对微丝的解聚没有明显影响。另外不抑制肌肉收缩，因为肌纤维中肌动蛋白丝是稳定结构，不发生组装及去组装的动态平衡。 鬼笔环肽(philloidin)：与微丝表面有强亲和力，但不与肌动蛋白单体结合，对微丝的解聚有抑制作用，可使肌动蛋白丝保持稳定状态。 影响微丝组装的药物对细胞都有毒害，说明微丝的功能依赖于肌动蛋白的组装与去组装的动态平衡。 三、肌球蛋白：依赖于微丝的分子马达 分子马达（molecular motor)主要是指依赖于微管的驱动蛋白（kinesin)、动力蛋白（dynein)和依赖于微丝的肌球蛋白（myosin)这三类蛋白质超家族的成员。它们既能与微管或微丝结合，又能与一些细胞器或膜状小泡特异性地结合，并利用水解ATP所产生的能量有规则地沿微管或微丝等细胞骨架纤维运输所携带“货物”。 Ⅱ型肌球蛋白：在肌细胞中，Ⅱ型肌球蛋白组装成肌原纤维的粗丝（双极性、高度稳定）；在非肌细胞中Ⅱ型肌球蛋白参与胞质分裂环的形成和张力纤维的活动（临时性）。 非传统类型的肌球蛋白：细胞中分离出的与Ⅱ型肌球蛋白不同的肌球蛋白，其中研究较多的是Ⅰ型和Ⅴ型。 二、微丝网络动态结构的调节与细胞运动 非肌肉细胞内微丝的结合蛋白 细胞皮层 应力纤维 细胞伪足的形成与迁移运动 微绒毛 胞质分裂环 微