西南大学崇德湖中光合细菌的分离及初步鉴定.docVIP

西南大学崇德湖中紫色非硫光合细菌的分离及初步鉴定 摘要： 西南大学校园崇德湖水体污染较严重，而紫色非硫光合细菌可以净化水体，因此对该湖水样进行鉴定，鉴定其紫色非硫光合细菌数量的多少。利用特异性培养基对西南大学校园崇德湖水样进行富集、分离和纯化, 得到了1株紫色非硫细菌( PNSB) , 依据细菌形态特征及群落形态特征及特性观察实验, 初步鉴定这些光合细菌属于红篓菌属细菌。 关键词：紫色非硫光合细菌；分离；鉴定；崇德湖 正文： 一般湖中生物在死亡后尸体堆积于湖中。这些物质腐败后产生的氨氮、硫化氢等有害物质直接污染水体及池底, 这些有害物质除直接危害养殖对象外, 同时也是病原微生物的营养源, 使病菌大量繁殖. 紫色非硫细菌( PNSB) 是光合细菌( PSB) 中最重要的一大类, 是无氧光合细菌中种属最多、分布最广、形态生理生化特征最为多样、系统发育最为复杂的一群。紫色非硫细菌代谢类型多样, 具光合、固碳、降解大分子有机物、固氮、脱氮、硝化、反硝化、硫化物氧化等多种功能, 且细胞富含蛋白质、氨基酸等多种生理活性物质, 因而成为具有净化养殖水体、增加动物营养、促进生长和增强防病抗病能力等功能的重要微生物资源。本课题采集校园湖中水样, 对分离出的紫色非硫细菌进行了生物学特性的研究及初步鉴定。 材料和方法： （一）样品： 西南大学崇德湖水样 （二）培养基： 1、富集培养基成分：KH2PO4 0.5g；CH3COONa 3g；MgSO4·7H2O 0.2g；CaCl2·6H2O 0.05g；酵母膏0.05g；CH3CH2COONa 0.3g；K2HPO4 0.3g；（NH4）2SO4 0.3g；NaCl0.1g；pH 7.2；蒸馏水100mL。 2、分离培养基成分：酵母膏3g；蛋白胨3g；琼脂5g；CaCl2·6H2O 0.3g；NaCl0.3gMgSO4·7H2O 0.5g；pH 6.8；蒸馏水100mL。 3、高浓度NaCl特异培养基：酵母膏3g；蛋白胨3g；琼脂5g；CaCl2·6H2O 0.3g；NaCl3gMgSO4·7H2O 0.5g；pH 6.8；蒸馏水100mL。 （三）菌种的分离纯化： 采样：采崇德湖边的水样一杯。　　2、富集：富集培养时，将采集的样品倒入配制好培养液并已灭菌的三角瓶，排除其中空气，加塞，充分摇匀，瓶外再用塑料薄膜裹住扎牢，以减少水分蒸发。培养温度为5℃～35℃。光照可以利用阳光，夜晚时则利用人工光源，光照强度的适宜范围为5000Lux～10000Lux。在这样的培养条件下，大约经过一周的培养，在玻璃瓶壁上会出现光合细菌的菌落，或者整个培养液成红色。（富集操作可以重复进行，方法是将初步富集的光合细菌的菌液或泥土移入磨口玻璃瓶中继续培养，反复多次，光合细菌占绝对优势时可确认富集成功。为了避免在培养液中藻类和绿杆菌科的细菌的发展，可采用滤光片，使波长800纳米或更长波长的光透过，这样可以更有效地达到富集紫色非硫细菌的目的。）　　3、分离：　富集培养成功后，紧接着进行分离培养。将富集菌液涂布到平板分离培养基上，在25℃～35℃恒温下进行黑暗有氧培养。 4、纯化： 紫色非硫细菌生长速度较快，大约在一周左右移植。将平板上菌种接着到斜面培养基上进行纯化培养。先在黑暗中有氧恒温培养，温度25℃～35℃，黑暗有氧条件下培养一周左右即长出有氧条件下生长的紫色非硫光合细菌。接着在厌气、光照条件下培养，在温度25℃～35℃，光照2000Lux～3000Lux，密封无氧的条件下培养一周至两周左右，就能长出光合细菌菌落。 （四）菌种鉴定： 细菌个体形态学观察： 对菌种进行革兰氏染色，在显微镜油镜下观察其细胞形态、大小、染色反应。 2、细菌菌落形态及特性观察： 观察黑暗有氧生长状态下细菌菌落的形态，大小，颜色，生长状态。 观察在光下无氧条件下生长的细菌菌落的形态，大小，颜色，生长状态。 生长特性鉴定： 分别用含0.3%NaCl的正常培养基及含3%NaCl的培养基对菌种进行黑暗有氧培养鉴定，看其是否能在高浓度NaCl中生长。 结果与分析： （一）、结果： 1、 细菌个体形态学观察结果(如图1）： (革兰氏染色：细胞呈红色，为阴性。 (细胞形态：该菌种细胞稍有螺旋，但不足一圈，呈弧状，是为弧菌。 (细胞大小：该菌种细胞长约1~3um，宽约0.3~0.7um。 2、细菌菌落形态及特性观察： 1）黑暗有氧条件下（图2、图4）： (菌落形状：群落圆形光滑，边缘也呈光滑流线型， (菌落大小：0.5mm~2mm (菌落颜色：粉红色 ④菌落生长状态：生在极快，一般三到四天左右就长出1mm左右的菌落。 2）光照无氧条件下（图3）