尖孢镰刀菌非致病性菌株FJAT-9290.ppt

尖孢镰刀菌多态性及枯萎病 植物疫苗工程菌的研究 福建农林大学，福建省农业科学院 2013年 05月 30日 姓 名：詹 洪 导 师：刘 波 博士、研究员 报告内容 研究背景 技术路线 研究内容 总结与展望 发表文章 致谢 大型分生孢子 尖孢镰刀菌（Fusarium oxysporum Schl.）属半知菌类(Imperfecti fungi)、从梗孢目(Moniliales)、瘤座孢科(Tuberculariaceae)、镰刀菌属(Fusarium)。 一、研究背景 一、研究背景 侵入植物的维管束系统 100个科 作物减产10-60% 化学土壤熏蒸或者培育抗病品种 生物防治 致病性尖孢镰刀菌 一、研究背景 可在植物中定植但不引起发病 对致病性尖孢镰刀菌有拮抗作用 生物防治 FO47用于防治多种蔬菜、花卉枯萎病 非致病性尖孢镰刀菌 一、研究背景 本实验室保存的非致病性尖孢镰刀菌FJAT-9290，可在多种作物中安全定殖，对番茄盆栽苗有明显的促长作用，且对其枯萎病的防效达76% FJAT-9290 二、技术路线 尖孢镰刀菌 致病性菌株的 多态性 ISSR遗传多态性 脂肪酸生物标记多态性 植物疫苗工程菌的生物学特性 植物疫苗工程菌 对枯萎病的防效 西瓜 香蕉 尖孢镰刀菌致病菌株的ISSR遗传多态性 尖孢镰刀菌致病菌株的脂肪酸生物标记多态性 枯萎病植物疫苗工程菌（尖孢镰刀菌非致病性菌株FJAT-9290） 的生物学特性 4. 枯萎病植物疫苗工程菌（尖孢镰刀菌非致病性菌株FJAT-9290） 对枯萎病的防效 三、研究内容 筛选出15条背景清晰、信号强、多态性明显的引物 PCR反应体系： 30 mmol MgCl2; 3 mmol dNTP; 8 μmol引物; 1.0 U Taq DNA聚合酶; 20 ng 模板DNA; 扩增出165条条带，其中特征性条带163条，多态性平均比例98.8%。 尖孢镰刀菌DNA 基因组的SSR 区域的遗传差异明显、多态性高，表明ISSR 标记技 术用于分析尖孢镰刀菌种内遗传差异十分有效。 当遗传相似系数为0.84时，可分为6类。可将不同寄主与地理分布的菌株区分开。 （1）甜瓜寄主3类，分别为采自福州闽候、莆田和福州永泰。 （2）苦瓜寄主1类，均来自福州闽候。 （3）西瓜寄主2类，分别为采自福州永泰和福清。 图 瓜类尖孢镰刀菌ISSR多态性 当遗传相似系数为0.77时，可分为6类。可将不同寄主与地理分布的菌株区分开。 （1）番茄寄主2类，分别为来自浙江、福州和河北。 （2）辣椒寄主3类，来自福州漳州、莆田和福清。 （3）茄子寄主1类，来自厦门。 图 茄科尖孢镰刀菌ISSR多态性 X1-- 16:0；X2--16:1 cis 9 (w 7)；X3--20:0； X4--18:0；X5--iso 17:1 G (w 11)； X6--15:0； X7--14:0； X8--15:0 ANTEISO；X9--15:0 iso； X10--Feature 8 | 18:1 (w 8) | 18:1 cis 9 (w 9)；X11--18:2 cis 9,12/18:0a。 类群Ⅰ完全分布型脂肪酸。 类群Ⅱ不完全分布型脂肪酸。 类群Ⅲ偶现脂肪酸，仅在瓜类尖孢镰刀菌中出现。 λ=15.97 尖孢镰刀菌脂肪酸生物标记为指标的进化过程，来自苦瓜的尖孢镰刀菌起着在甜瓜和花生的尖孢镰刀菌之间的过渡性进化作用。 马氏距离，可变类平均法。 当λ=13.5时，可分为3类。可将不同寄主的菌株区分开。 （1）第1类为甜瓜寄主。 （2）第2类主要为苦瓜寄主。 （3）第3类为西瓜寄主。 从聚类分析的结果可以看出，尖孢镰刀菌脂肪酸生物标记为指标的进化过程，茄科尖孢镰刀菌未表现出明显的寄主分化。 马氏距离，可变类平均法。 当λ=12.54时，可分为3类。可将不同寄主的菌株区分开。 （1）第1类主要为番茄寄主。 （2）第2类主要为茄子寄主。 （3）第3类为辣椒寄主。 λ=12.54 菌丝干重、pH值与致病菌株无显著差异； 产孢量：非致病菌株致病菌株； 还原糖含量：非致病菌株下降快； 菌丝干重 产孢量 pH值 还原糖含量 pH=8时菌丝生长最快 pH=7时菌株产孢量最大 偏碱性环境有利于菌株的菌丝生长。 淀粉最利于非致病性菌株FJAT-9290菌丝生长；致病性菌株FJAT-282 对碳 源的变化不敏感。 葡萄糖和蔗糖最利于非致病性菌株FJAT-9290产孢；果糖最利于致病菌菌株FJAT-282产孢。 菌株FJAT-9290的菌落分为两类：蔗糖（淀粉、山梨醇）；果糖（木糖、葡萄糖）。 菌株