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PCR引物设计 PCR引物设计步骤 4、RACE-PCR 通常在已知某基因cDNA中间一段序列时，为了获得其cDNA全长，所进行的一种cDNA末端扩增的方法即快速cDNA末端扩增PCR（Rapid Amplification of cDNA Ends PCR，RACE-PCR）。该方法包括3’-RACE法和5’-RACE法两种。 5.实时荧光定量PCR Real-time quantitative Polymerase Chain Reaction 简称 Real Time PCR DNA分子标记 第一代DNA分子标记 限制性片段长度多态性（RFLP） 第二代DNA分子标记 微卫星标记 第三代DNA分子标记 SNP * 引物设计原则： 1.长度在16-30bp，GC含量在45-55%之间。 Tm=4(G+C)+2(A+T)。 2. 碱基分布表现出随即性，避免相同碱基 连续排列。 引物内部自身连续互补碱基不能大于3bp ， 以免形成二级结构（发夹结构）。 4.两引物之间不应该存在互补性，尤应避免3′ 端的互补重叠以防引物二聚体的形成。一般情况下，一对引物间不应多于4个连续碱基的同源性或互补性。 5. 引物必须经GenBank查询后，证实没有与 其他非目的DNA有高度互补，才能使用。 1.设计引物