第2节 基因工程及其应用.pptVIP

1、杂交育种的特点 2、诱变育种的特点 资料1：以往，治疗糖尿病的胰岛素是从动物胰腺中提取的，从100千克猪、牛等动物的胰腺只能提取3－4克胰岛素，治疗一个患者需宰杀40－50头牛，这种药物的造价就可想而知了。 资料3：如图，这是“嫁接”了人胰岛素基因的大肠杆菌，它能大量合成人胰岛素，用来治疗糖尿病等疾病，使胰岛素的生产成本大大降低。 几种常见育种方法的比较 * 目前把重组质粒导入细菌时，效率还不高，导入完成得到的细菌，实际上有的根本没有导入质粒，有的导入的是普通质粒，只有少数导入的是重组质粒。 * * * * * * * * 过渡导课 导入受体细胞的结果 1、根本没有导入 2、导入质粒 3、导入重组质粒 * * 使用DNA连接酶制作重组DNA分子 甲片段 CTTCATG AATTCCCTAA GAAGTACTTAA GGGATT 乙片段 GGCATCTTAA AATTCCGTAG 重组DNA分子 GGCATCTTAA AATTCCGTAG 思考：DNA聚合酶和DNA连接酶的异同点？ 相同点：都催化形成磷酸二酯键； 不同点：DNA聚合酶是将一个个游离的脱氧核苷酸连起来， DNA连接酶是将DNA片段连起来。 限制酶、解旋酶、DNA（水解）酶的作用？ 拓展：基因工程中的工具酶与其他酶的比较 探究思考： 已知限制酶能将外来的DNA切断，对自己的DNA无损害。 设想如果我们把外源DNA分子直接导入受体细胞，结果会怎样？ 可见外源DNA分子还需要特殊的搬运工具运载到受体细胞（如大肠杆菌、动植物细胞）中。哪么谁能承担这个任务呢？ 为了让目的基因能成功的进入受体细胞且不被切割，我们还需要一种工具 ，运载体，能帮助目的基因进入受体细胞还能防止目的基因被受体细胞切割。L. 目的基因(人胰岛素基因)怎样才能导入受体细胞(如大肠杆菌)？ 导入过程需要运输工具——运载体。 运载体的作用有哪些？ 作用一：作为运载工具，将目的基因(人胰岛素基因)转移到受体细胞(大肠杆菌)中去。 作用二：利用运载体在受体细胞(大肠杆菌)内，对目的基因(人胰岛素基因)进行大量复制。 3.基因的运输工具——运载体 质粒： ●存在于细菌及酵母菌等生物的细胞中 ●游离在拟核或细胞核之外的能够自主复制的小型环状DNA分子； 运载体应该具有什么特点呢? 作用：将目的基因送入受体细胞并使其在受体细胞中表达及稳定存在。 种类：质粒（最常用）、噬菌体和动植物病毒 ●质粒的存在对受体细胞 无影响。 ●常含有抗药基因（标记 基因）； 大肠杆菌的质粒 最常用的质粒是大肠杆菌的质粒，其中常含有抗药基因，如四环素抗性基因，青霉素的抗性基因。 ●有些质粒含有抗药基因 （标记基因）； ●质粒的存在对受体细胞无影响。 质粒：存在于许多细菌以及酵母菌等生物的细胞中，是拟核或细胞核外能够自主复制的很少的环状DNA分子。 最常用的质粒是大肠杆菌的质粒，其中常含有抗药基因，如四环素抗性基因，青霉素的抗性基因。 运载体应该具有什么特点呢? 胰岛素基因 基因工程操作中，常常用同种限制酶剪切含目的基因的DNA分子和运载体： 为了保证能产生相同的黏性末端，能成功拼接 运载体应具备的条件： 1.能够在宿主细胞内复制并稳定保存； 2.具有多个限制酶切点以便与多种目的基因相连； 3.具有标记基因，便于检测目的基因是否导入受体细胞 天然质粒一般都不能直接做基因工程的运载体，都要经过修饰 提取目的基因 1 目的基因与运载体结合 2 将目的基因导入受体细胞 3 目的基因的检测和鉴定 4 目的基因是人们所需要转移或改造的基因。 如苏云金芽孢杆菌的抗虫基因，还有植物的抗病（抗病毒、抗细菌）基因、种子贮藏蛋白的基因，以及人的胰岛素基因、干扰素基因等。 用特定的限制性内切酶切割供体DNA，获得所需的目的基因 1）用限制性内切酶切断目的基因，使其出现一个切口，露出黏性末端。 2）用同一种限制性内切酶切割质粒，使其产生相同的黏性末端。 3）将切下的目的基因片段插入质粒的切口处，再加入适量DNA连接酶，形成了一个重组DNA分子（重组质粒） 目的基因与运载体的结合过程，实际上是不同来源的基因重组的过程。 常用的受体细胞： 细菌（大肠杆菌、枯草杆菌、土壤农杆菌） 动物细胞：受精卵 植物细胞：体细胞或受精卵 实验处理中的受体细胞中真正摄入了重组DNA的很少，必须将含有重组DNA的受体细胞从中检测出来。 5、第三步就要将重组DNA分