专题2-课题1-微生物的实验室培养.pptVIP

平板划线 思考 ⑴为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？ 第一步灼烧：消灭接种环上的微生物避免污染培养物； 每次划线前灼烧：为了杀死上一次划线结束后，接种环残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少，以便得到菌落。 操作结束后灼烧：杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境及感染操作者。 思考 ⑵在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？ 避免接种环温度太高，杀死菌种 ⑶在作第二次及其后的划线操作时，为什么总是从上一次划线的末端开始划线？ 划线后，线条末端细菌的数目比线条起始处要少，每次从上一次划线的末端开始，能使细菌的数目随着划线次数的增加而逐渐减少，最终得到由单个细菌繁殖而来的菌落。 （二）纯化大肠杆菌： 2.常见接种方法： (2)稀释涂布平板法： 将菌液进行一系列的梯度稀释后，分别涂布到固体培养基表面。稀释度足够高时，能培养出单个菌落。 主要用于分离菌种并计数。 涂布器 系列稀释 9ml 稀释液 1ml 9ml 稀释液 1ml 10-1 10-2 9ml 稀释液 9ml 稀释液 9ml 稀释液 9ml 稀释液 1ml 1ml 1ml 1ml 10-3 10-4 10-5 10-6 涂布平板 滴 灼 试 涂 涂布器末端浸在体积分数为70%的酒精中 三、结果分析与评价 思考： 若将接种后的培养基和一个未接种的培养基都放在37 ℃恒温箱中，培养一天，观察到如下结果，请分析可能的原因。 1.在培养时，培养皿是否需要倒置？ 需要 三、结果分析与评价 未接种培养基的作用是对照，应该没有菌落生长，若有菌落，说明培养基灭菌不彻底或被污染。 2.未接种的培养基表面有菌落生长，说明了什么？ 三、结果分析与评价 3．在培养基上观察到了不同形态的菌落，可能的原因是？ 不同的菌落代表不同的微生物；产生原因可能是培养基或接种过程中有其它微生物污染。 4. 培养12h和24h后观察到的实验结果相同吗？ 菌落大小：变大；菌落分布位置：不变。 四、课题延伸： 1．菌种的临时保存： 将菌种接种到试管的固体斜面培养基，放入4℃冰箱中保存。以后每3~6个月，要将 菌种转移到新的培养基。 四、课题延伸： 2．菌种的长期保存： 3ml甘油瓶中装入1ml甘油后灭菌，再加入1ml菌液，混匀后放入-20℃冷冻箱保存。 微生物的实验室培养 培养基种类 无菌操作技术 纯化分解尿素的细菌 培养基的配制 系列 稀释 平板 涂布 平板划线法 稀释涂布平板法 计算→称量→溶化→调pH（→分装→加棉塞）→灭菌→倒平板 总结 培养基配制原则 培养基配制方法 (二)微生物培养基 3.满足微生物生长的条件： 培养基除要提供上述几种主要营养物质外，还满足微生物生长的 pH 、 特殊营养物质 和氧气 等要求。 ①pH：真菌 5.0~6.0 酸性 细菌 6.5~7.5中性或微碱性 (二)微生物培养基 （1）按物理性质划分： 5.培养基的种类： （固体、半固体培养基需添加凝固剂，如琼脂；两者的差别是添加量的多、少） ①液体培养基 ②半固体培养基 ③固体培养基 （用于工业生产） （用于观察微生物的运动、鉴定菌种） （用于微生物的分离、计数） 微生物在其表面生长可形成菌落 进行选择培养可以增加所需目的菌的浓度 (二)微生物培养基 5.培养基的种类： ①选择培养基P22： ②鉴别培养基： 加入某化学物质，以抑制不需要的微生物的生长，促进所需要微生物的生长。 加入某种指示剂或化学药品配制而成的，用以鉴定不同种类的微生物。特定菌种显色，其他菌种不受抑制、但不显色。 （3）按用途划分： （作用：分离微生物、进行选择培养） （作用：鉴别微生物） 青霉素 抗青霉素基因 选择培养基 在基因工程中，对导入重组质粒的大肠杆菌的筛选 伊红－美蓝 鉴别培养基 A A B B C C D D 大肠杆菌在伊红－美蓝培养基上菌落呈现黑色 常见的选择培养基举例： （1）添加： ①青霉素 ：抑制细菌、放线菌 保留（分离）真菌，如霉菌、酵母菌 ②高浓度NaCl：抑制多种细菌， 分离金黄色葡萄球菌 (二)微生物培养基 5.培养基的种类： （3）按用途划分： 常见的选择培养基举例： （2）缺少： ①培养基缺少有机碳源 分离自养型微生物（利用CO2 ） ②培养基缺少氮源 分离固氮微生物（利用N2 ） (二)微生物培养基 5.培养基的种类： （3）按用途划分： （三）无菌技术 1.获得纯净培养物的关键(目的）是 防止外来杂菌的入侵 。 （三）无菌技术 2.无菌技术包