克仑特罗(Clenbuterol)ELISA检测试剂盒说明书.doc

泰乐菌素（Tylosin）ELISA 产品编号：HE09022 一、概要 泰乐菌素属大环内酯类抗生素，主要用于抗畜禽细菌及支原体感染，亦可作猪的饲料添加剂以促进增重和提高饲料转换率。 本试剂盒是应用ELISA技术研发的新一代药物残留检测产品，与仪器分析技术相比具有快速、简便、准确和灵敏度高等特点, 能最大限度地减少操作误差和工作强度 。 二、原理 本试剂盒采用间接竞争ELISA方法，在微孔条上预包被偶联抗原，样本中的残留物泰乐菌素与微孔条上预包被的偶联抗原竞争抗泰乐菌素的抗体，加入酶标二抗后，经TMB底物显色，样本吸光值与其所含泰乐菌素的含量成负相关，泰乐菌素 可肌肉、肝脏、等样本中泰乐菌素药物的残留。 泰乐菌素 ………………………………………100% 五、使用单位需自备的设备及试剂 设备： ┅┅微孔板酶标仪450nm/630nm ┅┅涡旋仪 ┅┅离心机 ┅┅天平：感量0.01g ┅┅刻度移液管：10ml ┅┅聚苯乙烯离心管：10ml、50ml ┅┅玻璃离心管：10ml ┅┅微量移液器：单道 20(l～200(l、200(l～1000(l 多道 250(l 试剂： ┅┅三氯甲烷(分析纯) ┅┅乙腈(分析纯) ┅┅无水甲醇(分析纯) ┅┅正己烷(分析纯) ┅┅浓盐酸 ----氢氧化钠 ----去离子水 六、提供的材料与试剂 1、96孔酶标板×1块 2、标准品×6瓶： （1ml/瓶） 0ppb, 1ppb, 3ppb,9ppb, 27ppb,81ppb 3、高浓度标准品：1ppm（1ml/瓶） 4、泰乐菌素酶标物……………………………………12ml 5、泰乐菌素抗试剂………………………………………6ml 6、 底物液 A液 ……………………………………… 6ml 7、底物液B液 ………………………………………6ml 8、终 止 液 …………………………………………6ml 9、浓缩洗涤液(10×) ……………………………………40ml 10、泰乐菌素浓缩样品稀释液(2×)…………………………40ml 七、溶液的配制 配液1: 样品稀释液 用去离子水将泰乐菌素浓缩样品稀释液(2×)按1:1体积比进行稀释，即：1份泰乐菌素浓缩样品稀释液(2×)+1份去离子水；用于提取样本的稀释，样品稀释液在4℃环境可保存一个月。 配液2: 洗涤工作液 用去离子水将浓缩洗涤液(10×)按1:9体积比进行稀释，即：1份浓缩洗涤液(10×)+9份去离子水；用于酶标板的洗涤，洗涤工作液在4℃环境可保存一个月。 配液3: 0.1M NaOH 称取0.4g NaOH 加去离子水定至100ml并使其充 分溶解。: 0.1M盐酸溶液 830(l浓去离子水定至100ml。: 样本提取液（乙腈-0.1 HCl）—甲醇溶液 将乙腈84l+0.1M HCl 16ml混合混合 样本处理前须知： （a）实验中必须使用一次性吸头，在吸取不同的试剂时要更换吸头。 （b）实验之前须检查各种实验器具是否洁净，必须使用洁净实验器具，以避免污染干扰实验结果。 （c）未处理的样本冷冻保存。 （d）处理后的样本可在2-8℃避光保存24h。 （）蜂蜜前处理方法称取1±0.05g蜂蜜中，加2ml去离子水涡动2min至蜂蜜全部溶解，再加入ml三氯甲烷振荡5min； ┅┅4000r/min以上，离心10min去上层，取下层有机相2ml50～60℃氮气流用1ml稀释后的溶解干燥后的残留物取50(l用于分析（）肌肉、肝脏前处理方法称取2±0.05g样本于50ml离心管中加入8ml，振荡5min； ┅┅4000r/min以上,离心10min取上清液2ml，加入0.1M NaOH溶液2ml,混合后加入8ml三氯甲烷振荡5min； ┅┅4000r/min以上，离心10min去上层，取下层有机相5ml50～60℃氮气流1ml稀释后的1ml正己烷充分振荡000r/min以上离心min，除去上层取下层50(l用于分析 测定前应须知： 1、使用之前将所有试剂和需用板条的温度回升至室温（20～25℃）。 2、使用之后立即将所有试剂放回2～8℃。 3、在ELISA分析中的再现性，很大程度上取决于洗板的一致性，正确的洗板操作是ELISA测定程序中的要点。 4、在所有恒温孵育过程中，避免光线照射，用盖板膜封住微孔板。 操作步骤： 1、将所需试剂从冷藏环境中取出，置于室温（20～25℃）平衡30min以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀。 2、取出需要数量的微孔板，将不用的微孔放入自封袋，保存于2～8℃。 3、洗涤工作液在使用前也需回温。 4、编号：将样本和标准品对应微孔按序编号，每个样本和标准品做2孔平行，并记录标准孔和样本孔所在的位置。