培养基的pH.ppt

大量无素 微量无素 浓缩10倍（量加大10倍） 在配制1L培养培养基时，只取 ? ml 浓缩100倍（量加大100倍） 在配制1L培养培养基时，只取 ml 母液stock的配制 以KNO3为例 1L培养基需要量为19g。 在配制母液时，增加10倍量，为190g。在母液中的浓度为 g/L，即 g/ml 在配制培养基时，取 ml， ml× g/ml= g 以KNO3为例 1L培养基需要量为19g。 在配制母液时，增加10倍量，为190g。在母液中的浓度为190g/L，即0.19g/ml 在配制培养基时，取100ml，100ml× 0.19 g/ml=19g （4）培养基分注 1．灭菌前分 2、灭菌后分，三种方法：虹吸式、滴管方法、漏斗； 3．分注适量，一般占试管或三角瓶的1/3～1/4； 4．不要把培养基粘到管壁；分注后马上用棉盖塞住，并做好标记。 5、无菌技术 培养基灭菌 器皿试材和接种工具的灭菌 培养室和接种室的灭菌 真菌污染长孢子 真菌污染长孢子 污染的情况 细菌污染长菌落 细菌污染长菌落 (1)、无菌室 培养室和接种室 室内灭菌可用 2%新洁尔敏擦洗 75%乙醇喷雾 UV照射20分钟 2、培养基 灭菌方法有 高温高压蒸气灭菌 过滤灭菌 121°C，1.1kg/cm2,15-20分钟，时间过长，培养基成分易变性失效 在高温高压下易分解的培养基和激素类 3、器皿和接种工具的灭菌 解剖刀、镊子、剪刀等工具采用干热灭菌法，用烘箱灭菌，120 °C时1小时 4、外植体的灭菌 充分灭菌，但不能损伤外植体 不同外植体，灭菌要求不一样 原则 常用方法 75%乙醇 氯化汞（升汞） 次氯酸钠 表面杀菌，具湿润和杀菌作用，浸30秒 常用浓度0.1%处理5-10分钟，有残毒 浓度2-10%，时间15-30分钟，对植物无害 * 离体培养的优点之一就是在人工控制的环境条件下，使培养物生长发育，研究植物的生命活动，这是区别于大田栽培以至于温室栽培的不同特点。人们把研究离体培养的环境条件控制的研究内容称为离体生态学（In vitro Ecology)。但事实上要控制离体培养的环境条件并非易事。因各种植物所需的环境条件不同，要求提供所有培养物的合适条件，需要大量的设备，而且目前在离体培养中，许多环境因素还不很了解。此处只着重介绍光、温、湿等条件。 * 百合原球茎在黑暗条件下，长出小球茎，在光照条件下，长出叶片。黑暗有利于愈伤组织的诱导，光照则有利于器官分化（类似于日照有利于身体健康）。 不同光照质量（即不同光波）对器官分化有密切关系。 * 离体培养中对温度的调控比光照显得更为突出。 外植体的增减温度，一般低于15C或高于32C，对生长都是不利的。大多数植物最适的培养温度为23-323C，通常控制在25?2C恒温条件下。对于热带的园艺植物，一般控制在30 ?2C。对于Potato在20C温度下生长最快。不同植物有着最适的生长温度，满足其特定的温度要求，便可以获得最侍培养效果。 离体培养中的湿度，主要指培养器内的湿度。培养瓶内的相对湿度有可能达到100%，但不能排除液体培养与固体培养时的湿度变化，固体培养时琼脂的用量对培养环境的湿度有影响。但湿度变化对外植体生长发育造成多大的影响，尚无法研究。 ?2C * 植物离体培养的理论，源于19世纪30年代德国植物学家Schleiden和动物学家Schwann提出的”细胞学说“，其主要观点：细胞是生物体的基本结构单位，由它构成整个生物个体；同时认为植物细胞又是在生理上、发育上具有潜在的全能性功能单位。Schwann还指出：”每一个细胞应该可以独立生活和发展，假如具有的条件正如它存在于有机体内一样…….“。 1902年德国著名植物学家Haberlandt根据细胞学说，提出高等植物的器官和组织可以不断分割，直至单个细胞的观点，这种单个细胞是具有潜在的全能性功能单位。 * Knotte为Haberlandt的学生 Robbins为美国人 * White为美国人 * 琼脂是由海藻来的多糖物质。 * Steward为美国康乃尔大学工作的英国人，1948年即开始胡萝卜离体培养研究，1952年与同事共同设计出一种培养装置A（细胞繁殖器）。他们在胡萝卜组织培养过程中，观察到培养液常常变混浊，并查明是由于培养组织上散落的游离细胞和细胞团。1956年发表了可以利用愈伤组织液体产生悬浮细胞，悬浮细胞可以继代培养的论文。1968年他又报道，利用胡萝卜的次生韧皮部的悬浮培养物，在含椰乳的培养基中观察到类似胚胎发生的结构（胚状体）。由胚状体先长根，后长芽，并形成完整植株，为植物细胞全能性的理论提供了有力的实验证据。 1、玻璃器皿 培养用 显微镜下观察用 细胞微室 载玻片glass slide 培养皿petri dish 试管test