年增率再度由负转正.ppt

竞赛辅导专题7 动物克隆 动物的克隆繁殖 1.动物细胞全能性的表现程度 2.动物难以克隆的原因 * 动物的克隆 动物克隆的技术基础是什么？ 动物的细胞和组织培养 动物克隆的理论基础是什么？ 动物细胞核具有全能性 动物细胞和组织培养的原理是什么？ 细胞增殖 动物细胞培养和组织培养之间的关系如何 广义的组织培养是指各种生物体成分的体外培养。包括细胞培养、组织培养和器官培养。 细胞培养也会呈现一定的组织特性；长期的组织培养最终成了简单的细胞培养。 动物细胞培养过程 取动物组织块 剪碎组织 用胰蛋白酶处理分散成单个细胞 转入液体培养基中培养 细胞贴壁生长 放入到CO2培养箱 原代培养 传代培养 细胞悬浮液 用胰蛋白酶处理分散成单个细胞 从机体取出后立即进行的细胞、组织培养，到培养的细胞形成生长晕并增大为止。 将原代培养细胞分成若干份，接种到若干份培养基中，使其继续生长、增殖。 严格说，将细胞从一个培养瓶转移或移植到另一个培养瓶为传代培养。 放入到CO2培养箱 传代 细胞 细胞系 细胞株 连续细胞系（能连续培养下去的细胞系） 有限细胞系（不能连续培养下去的细胞系） （如二倍体细胞） 发生了转化，大多具有异倍体核型 有的具有异体致瘤性 有的具有不死性（保留接触抑制现象， 不致癌） 通过一定的选择或纯化方法，从原代培养物或 细胞系中获得的具有特殊性质的细胞称为细胞株。 一般具有恒定染色体组型、同功酶类型、 病毒敏感性和生化特性等。 连续细胞株（连续多次传代培养） 有限细胞株（可传代次数有限） 细胞系：泛指可传代的细胞 传代培养的产物称为细胞株/细胞系 动物克隆培养法 1、定义： 把一个单细胞从群体中分离出来单独培养，使之繁衍 成一个新的细胞群体的技术。 3、结果： 得到纯系。遗传性状均一，表现的性状相似。 2、最基本要求： 必须保证分离出来的是单个细胞。 4、克隆形成情况： 无限细胞系、转化细胞系和肿瘤细胞原代细胞、有限细胞系 只有对培养环境有较大适应范围和具有较强独立生存能 力的细胞，才容易做细胞克隆。 5、提高克隆形成率措施： 选用适宜培养基、添加血清、 以滋养细胞支持生长、激素刺激、使用CO2培养箱调节PH。 6、最主要用途之一： 从普通细胞系中分离出缺乏特殊基因的突变细胞系。 通过性状得知缺乏基因的功能。 高等动物的全能细胞主要指受精卵以及前几次卵裂形成的细胞，它们具有全能性，即具有使后代细胞形成完整个体的潜能。 根本原因： 细胞的分化使各个细胞内基因活动不完全，发生了基因的差异表达。 一类基因是维持生存的，在各个细胞中都处于活动状态； 另一类基因随着组织器官和发育阶段不同而选择性表达。 3. 细胞核移植实验和动物的克隆繁殖 核移植 利用一个细胞的细胞核（供体核）来取代另一个细胞中的细胞核，形成重建的“合子”。 细胞核的移植常选用卵细胞作为受体细胞 实践证明：胚胎细胞核的移植成功率远高于成体细胞。 体细胞分化程度高，移植成活率低 胚胎细胞核分化程度低，移植成活率高 “多莉” 羊产生过程 母绵羊A 乳腺细胞（体细胞） 母绵羊B 未受精的卵细胞 母绵羊C的子宫 “多莉” 去核卵细胞 提取细胞核 细胞融合 胚胎移植 重组细胞 早期胚胎 动物已分化的体细胞有无全能性呢？ 结论：已分化的动物体细胞核具有全能性。 绵羊“多莉”克隆示意图 体细胞羊“多莉”克隆成功证明： ①高度分化细胞经过一定技术处理， 也可回复类似受精卵时功能； ②在胚胎和个体发育中，细胞质具 有调控发育的能力。 深挖部分内因 ①重组卵细胞复制DNA，但基因转 录并未开始； ②供体核DNA开始丢失来源于乳腺 细胞的最初阻止核基因的表达的 调节蛋白； ③重组卵细胞第3次分裂时，核DNA 被重新编排，胚细胞表达自己的基因， 并调控在代孕母子宫发育。 例题 关于哺乳动物细胞体外培养的难易程度，下列表述正确的是 A．乳腺癌细胞易于乳腺细胞，胚胎细胞易于脂肪细胞 B．乳腺细胞易于乳腺癌细胞，胚胎细胞易于脂肪细胞 C．乳腺细胞易于乳腺癌细胞，脂肪细胞易于胚胎细胞 D．乳腺癌细胞易于乳腺细胞，脂肪细胞易于胚胎细胞 A 例题2 请回答基因工程方面的有关问题： （1）（2）（3）略 （4）用限制酶EcoRV、Mbol单独或联合切割同一种质粒，得到的DNA片段长度如下图(1 kb即1000个碱基对)，请画出质粒上EcoRV、Mbol的切割位点。 答案 例题3 下图质粒都含E1和E2两种限制酶的识别，Apr表示抗青霉素的抗性基因，Tcr表示抗四环素的抗性基因。 (1)将两端用E